【摘 要】
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目的:在Hep3B肝癌细胞中,利用短发卡RNA干扰技术沉默真核翻译延长因子1A1基因(eukaryotic translation elongation factor 1A1,eEF1A1)的表达,探讨真核翻译延长因子1A1对肝癌Hep3B细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制。方法:首先,设计合成靶向的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)重组质粒,筛选稳定表达eEF1A1
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目的:在Hep3B肝癌细胞中,利用短发卡RNA干扰技术沉默真核翻译延长因子1A1基因(eukaryotic translation elongation factor 1A1,eEF1A1)的表达,探讨真核翻译延长因子1A1对肝癌Hep3B细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制。方法:首先,设计合成靶向的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)重组质粒,筛选稳定表达eEF1A1-shRNA的Hep3B细胞株。然后,通过实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法分别验证eEF1A1 m RNA和蛋白在肝癌Hep3B细胞中的表达情况。转染EF1A1-shRNA质粒后,分别检测细胞体外增殖能力、细胞克隆形成能力、细胞周期变化以及细胞周期相关蛋白如周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的蛋白表达。结果:(1)通过药物筛选,成功获得稳定低表达eEF1A1的肝癌Hep3B细胞株;(2)eEF1A1-shRNA质粒转染组与阴性对照质粒组相互比较,干扰组的细胞增殖能力和细胞克隆形成能力显著性的下降(P<0.05),并且干扰组中G1期细胞所占比例上升(P<0.05);(3)eEF1A1-shRNA转染组Cyclin D1、CDK4蛋白的表达水平下调(P<0.05)。结论:下调eEF1A1蛋白表达可以显著性抑制肝癌Hep3B细胞的增殖能力、细胞克隆形成能力并使得肿瘤细胞周期停滞在G1期,表明在肝癌的增殖过程中,高表达的eEF1A1蛋白可能起到调控的作用。
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