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目的：观察甲基化特异性转移酶抑制剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞HepG2增殖及PI3KC3基因甲基化和表达的影响，探讨PI3KC3基因在肝癌细胞中失活的主要机制及通过改变肝癌细胞PI3KC3基因甲基化来治疗肝癌的新思路。方法：采用不同浓度的5-Aza-CdR（0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L）分别处理HepG2细胞24h、48h和72h后，采用MTT（四唑盐比色法）法检测5-Aza-CdR处理对肝癌细胞株HepG2增殖的影响；采用qRT-PCR及Westernblotting方法检测PI3KC3基因mRNA及蛋白表达；甲基化特异性PCR来检测阴性对照组（未经5-Aza-CdR处理）和经20μmol/L5-Aza-CdR处理72h的HepG2细胞中PI3KC3基因甲基化的变化情况。结果：不同浓度的5-Aza-CdR（0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L）分别处理HepG2细胞24h、48h和72h后，MTT检测发现5-Aza-CdR对HepG2的体外增殖具有抑制作用，呈现时间及剂量依赖性（P <0.05），差异具有统计学意义；不同浓度的5-Aza-CdR（0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L）分别处理HepG2细胞24h、48h和72h后，qRT-PCR方法检测发现5-Aza-CdR对肝癌细胞株HepG2中PI3KC3mRNA的上调呈明显的时间、剂量依赖性（P <0.05），差异均具有统计学意义；Western blotting方法检测发现5-Aza-CdR对HepG2细胞中PI3KC3蛋白的上调呈时间、剂量依赖性（P <0.05），差异均具有统计学意义；MSP法测得阴性对照组（未经5-Aza-CdR处理）的肝癌细胞HepG2中PI3KC3基因甲基化与非甲基化共存，并且甲基化程度均明显高于非甲基化；加用去甲基化药物5-Aza-CdR20μmol/L处理72h后5-Aza-CdR组甲基化程度出现明显下降。结论：甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能抑制肝癌细胞HepG2增殖，其机制可能与5-Aza-CdR调控PI3KC3基因启动子的甲基化水平使PI3KC3表达上调有关。