【摘 要】
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目的:白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）由单核细胞和M1型巨噬细胞（主要参与促炎反应）产生,作为宿主防御策略的一部分,发挥清除感染细胞的功能。NF-κB信号通路由IκB激酶,IκB蛋白以及NF-κB二聚体组成。在炎症早期,细胞内IκB激酶被激活,导致IκB蛋白磷酸化后泛素化降解,NF-κB二聚体进入细胞核后对IL-6的转录发挥较强的调控功能。Hippo信号通路是近年来发现的一条进
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目的:白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）由单核细胞和M1型巨噬细胞（主要参与促炎反应）产生,作为宿主防御策略的一部分,发挥清除感染细胞的功能。NF-κB信号通路由IκB激酶,IκB蛋白以及NF-κB二聚体组成。在炎症早期,细胞内IκB激酶被激活,导致IκB蛋白磷酸化后泛素化降解,NF-κB二聚体进入细胞核后对IL-6的转录发挥较强的调控功能。Hippo信号通路是近年来发现的一条进化保守的激酶级联反应信号通路,通过抑制细胞增殖及促进细胞凋亡,实现对器官大小的调控。该激酶级联反应由Mst1/2、LATS1/2组成。LATS1/2激酶通过磷酸化Hippo信号通路下游共转录因子YAP1抑制其入核,从而影响其转录活性。我们以前的研究成果显示,在M0向M1型巨噬细胞极化过程中,磷酸化YAP1去磷酸化后入核,发挥共转录因子功能增加了IL-6的转录。IL-6信号转导主要有三条途径,分别为经典信号、反式信号以及反式呈递信号,其中经典信号是指细胞外的IL-6与细胞膜上的IL-6受体结合形成复合物,通过激活JAK-STAT信号通路诱导STAT3磷酸化。磷酸化STAT3又可以作为转录因子,正向调控IL-6的转录,起到信号放大的作用。作为细胞因子风暴的核心因子,IL-6的过度产生可导致某些慢性炎症性疾病的急性发生、CAR-T治疗的并发症加重,同时也是新冠肺炎转为重症的重要原因之一。综上所述,Hippo信号通路、NF-κB信号通路以及JAK-STAT信号通路可能对不同阶段IL-6的生成有调控作用,然而它们之间的关系尚不明确。本研究继续以LPS诱导的M1型巨噬细胞极化为模型,明确YAP1/NF-κB转录复合物对早期IL-6产生的影响、JAK-STAT信号在后期对IL-6的放大作用,阐明IL-6生成的具体机制。研究方法:1.在体外以PMA诱导THP-1细胞建立M0型巨噬细胞分化模型,LPS诱导M0建立M1型巨噬细胞极化模型;2.基因富集分析（GSEA）影响M1型巨噬细胞极化的信号通路;3.Western blot法检测巨噬细胞极化早期YAP1、NF-κB、STAT3蛋白的活性变化;4.Western blot法检测M1极化过程中TLR4抑制剂TAK-242对NF-κB和YAP1的影响;5.QPCR法检测M1型极化过程中TAK-242对YAP1下游分子和IL-6的影响;6.Western blot法检测M1极化过程中NF-κB通路抑制剂PS341对YAP1的影响;7.QPCR法检测M1极化过程中PS341对YAP1下游分子及IL-6的影响;8.Western blot法检测M1极化过程中YAP1抑制剂维替泊芬对NF-κB的影响;9.QPCR法检测M1极化过程中维替泊芬对NF-κB下游分子及IL-6的影响;10.Western blot法检测M1极化过程中YAP1激活剂牛磺脱氧胆酸对NF-κB的影响;11.QPCR法检测M1极化过程中牛磺脱氧胆酸对NF-κB下游分子及IL-6的影响;12.免疫荧光法M1型巨噬细胞极化过程中,YAP1和NF-κB在细胞内的定位;结果:1.生物信息学方法分析影响M1型巨噬细胞极化的信号通路;2.M1型巨噬细胞极化早期Hippo信号、NF-κB信号以及JAK-STAT信号活性的改变;3.巨噬细胞M1极化过程中,LPS通过TLR4调控YAP1活性;4.M1型巨噬细胞极化早期Hippo对NF-κB信号通路活性没有影响;5.M1型巨噬细胞极化早期NF-κB对Hippo信号通路活性没有影响;6.巨噬细胞M1极化过程中,YAP1与NF-κB于细胞核内共定位;7.M1型巨噬细胞极化早期NF-κB与Hippo信号通路共同调控STAT3的活性。结论:1.M1型巨噬细胞极化过程中,LPS通过TLR4分别调控YAP1和NF-κB的活性;2.YAP1与NF-κB在细胞核内共同调控IL-6的转录;3.上述产生的IL-6可能继续激活JAK-STAT通路,放大IL-6产成的信号。
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