两种不同富血小板血浆对肩袖损伤后腱-骨结合部愈合的影响

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目的:本研究采用纯富血小板血浆(P-PRP)、富白细胞富血小板血浆(L-PRP)对小鼠肩袖损伤后腱-骨结合部(BTJ)进行治疗,并通过组织形态学、酶联免疫吸附测定(ELISA)及生物力学测试,观察肩袖损伤后BTJ组织结构特征、血清中相关炎性因子的浓度变化以及生物力学性能的恢复,初步探讨富血小板血浆(PRP)中的白细胞对肩袖损伤后BTJ的影响,为今后P-PRP推广在肩袖损伤后BTJ修复的临床实践提供有效的理论依据。方法:选取C57BL/6小鼠(8周龄,雄性,20-22g)54只。(1)将预先制备好的同种异体P-PRP、L-PRP和全血各取0.2ml进行血液成分分析,剩余部分进行后续研究;(2)对小鼠右前肢进行冈上肌肌腱离断建立肩袖损伤模型,将小鼠随机分为3组即对照组、L-PRP组及P-PRP组,每组18只,分别取预先制备的同种异体L-PRP和P-PRP各约0.1ml,并与20μl 10%的Cacl2氯化钙+10U牛凝血酶的溶液混合形成凝胶,填充于L-PRP、P-PRP组损伤界面处,对照组:填充等量的生理盐水;(3)分别于术后4周和8周摘眼球取血并取冈上肌-冈上肌肌腱-肱骨头复合体标本,血液标本行ELISA检测相关炎性因子白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,复合体标本行组织学观察肩袖损伤后BTJ组织结构的恢复情况;并对术后8周复合体标本进行生物力学检测,评估其生物力学性能恢复。结果:(1)血液成分分析:P-PRP和L-PRP血小板浓度相似(P>0.05),且均高于全血(P<0.01);L-PRP中白细胞浓度均明显高于P-PRP和全血,差异明显显著(P<0.01),其中P-PRP与全血相比白细胞浓度差异有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色:术后4周,L-PRP、P-PRP两组BTJ的肌腱与骨面融合效果优于对照组,可见纤维软骨层,且L-PRP组软骨细胞和肌腱纤维的数量、成熟度以及细胞和纤维的排列顺序均优于P-PRP组;术后8周,L-PRP、P-PRP两组融合部位可见接近正常BTJ的四层过渡性结构,其中P-PRP组中融合部位纤维软骨层厚度和融合紧密程度优于L-PRP组,对照组中损伤BTJ部位融合良好出现纤维软骨层,软骨细胞较为成熟,但排列杂乱。(3)ELISA检测结果:术后8周,各组小鼠血清中IL-1β、TNF-α浓度较4周时均有所降低;L-PRP组小鼠血清中IL-1β浓度在术后4周和8周均显著高于P-PRP组和对照组,P-PRP组IL-1β浓度低于对照组,差异有明显显著性(P<0.01);而L-PRP组小鼠血清中TNF-α浓度则显著高于P-PRP组(P<0.01)和对照组;其中P-PRP组TNF-α浓度明显低于对照组,差异非常显著(P<0.01)。(4)生物力学测试:术后8周,L-PRP、P-PRP两组的生物力学性能指标拉断载荷(FL)和极限强度(US)与对照组比均有显著性提高;与L-PRP组相比,P-PRP组中的FL值增加0.44±0.02N(P<0.01)、US值增加0.78±0.28 Mpa(P<0.05)。结论:富血小板血浆可促进小鼠肩袖损伤后腱-骨结合部的愈合,在小鼠术后8周,纯富血小板血浆的愈合效果优于富白细胞富血小板血浆,而在术后4周富白细胞富血小板血浆的治疗效果较好。
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