论文部分内容阅读
就目前来看，我国动物营养学方面的研究工作基本尚处于机体水平：即在机体水平上研究各种营养素对机体的作用，在机体内的代谢与平衡，影响机体吸收营养素的因素等问题。分子水平方面的研究还刚刚起步，尚处于初级阶段。动物机体的生理病理变化，如生长发育、新陈代谢、遗传变异、免疫与疾病等就本质而言，多数是动物基因表达调控发生了改变的结果，许多生理现象的彻底阐明，最终需要在基因水平上进行解释。所以动物营养学的各方面研究应与分子生物学技术，尤其是与基因工程相结合，从分子水平上解释各种营养素对机体的作用机制，动物机体的生理病理变化等问题。 牛的消化功能由于其生理特征的特异性，而表现为消化的复杂性，一方面由于瘤胃内环境的复杂性，使得营养物质的转化和吸收不能因饲料中营养素含量的多少来决定牛体利用的多少；另一方面是代谢功能的复杂性，这给反刍动物营养工作者提出了严峻的任务。本研究利用生物信息学与分子生物学技术相结合的方法，克隆和定位了10个基因，获取了12个基因的相关信息，取得了如下结果： 1．以人的同源基因的cDNA为探针，从GenBank中搜索牛的同源EST，由EST构成的连接群(contig)设计引物，从三河牛基因组中分离克隆了12个基因的部分片段。这12个基因分别为：胆囊收缩素基因(CCK)、谷氨酸脱羧酶基因(GAD1)、谷氨酸脱羧酶基因(GAD2)、甘丙肽基因(GAL)、肠抑胃肽基因(GIP)、果糖二磷酸酶基因(FBP1)、磷酸酯酶基因(PSPH)、羧基肽酶基因(CPB1)、蛋白酶体激活因子PA700相关基因PSMC1、PSMC2、PSMC4和PSMD1基因，并将这些基因的部分序列提交给了GenBank，获得了收录号(DQ111991、DQ111992、DQ111993、DQ111994、DQ111995、DQ118401、DQ118402、DQ120511、DQ120512、DQ120513、DQ139315、DQ139316、DQ139317、DQ146944、DQ160296和DQ166528)。 2．采用电脑克隆策略、RT-PCR和RACE技术，获得了CCK、CPB1、FBP1、GIP基因的全长cDNA序列，并推导出了相应的氨基酸序列。并对序列的特征进行了分析。 3．利用TaqMam PCR技术分析了FBP1、PSPH和PSMC1基因在成年西门塔尔牛的肾脏、心脏、肺脏、脾脏、肝脏、肌肉、睾丸、瘤胃、小肠、淋巴、胸腺等11种组织中的表达情况。结果分析发现：FBP1基因在所检测的11种组织中均有表达，在睾丸组织中的表达量高；而PSPH和PSMC1基因在所检测的10种组织中均有表达，但PSPH基因在淋巴组织中表达量高，PSMC1基因在在肺脏中表达量高，这三