基于溶酶体途径的黑色素降解机制的研究及异甘草素、异欧前胡素对其的干预作用

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:monorrch
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目的:探究溶酶体与黑色素降解的相关性;观察异甘草素、异欧前胡素干预溶酶体酶活性及黑素色降解的影响。方法:1、黑色素细胞和Ha Ca T细胞共培养体的建立采用Transwell小室将A375黑色素瘤细胞和Ha Ca T人角质形成细胞进行共培养。2、异甘草素、异欧前胡素安全浓度的测定不同浓度异甘草素、异欧前胡素干预Ha Ca T细胞,通过MTT法检测吸光度以求得Ha Ca T细胞增殖率。3、异甘草素、异欧前胡素干预Ha Ca T细胞黑色素含量的测定采用Na OH裂解法对Haca T细胞进行裂解,利用分光光度计检测裂解液A405值。4、溶酶体酶参与黑色素降解的确认及异甘草素、异欧前胡素对溶酶体酶活性的影响采用Na OH裂解法对Haca T细胞进行裂解,采用相关试剂盒对酸性磷酸酶等溶酶体相关水解酶的活性进行分析。同时对溶酶体酶活性变化与黑色素含量变化的关系进行分析。结果:异甘草素、异欧前胡素最大安全浓度为8ug/ml,MTT法测定OD值,不同浓度异甘草素、异欧前胡素干预后计算出细胞增殖率,二者在浓度0.5ug/ml对细胞增殖有促进作用,故而排除,在异甘草素、异欧前胡素2ug/ml,4ug/ml,8ug/ml时细胞增殖率均大于90%,且对细胞增殖无显著影响。异甘草素、异欧前胡素干预下细胞内黑色素含量逐渐降低,且具有一定的浓度依赖性。异甘草素、异欧前胡素对酸性磷酸酶活性有促进作用,但其作用不具备浓度依赖性,且在4ug/ml时对酶活性影响最大。选取4ug/ml进行后续实验,加入溶酶体抑制剂,细胞内黑色素含量升高,加入异甘草素、异欧前胡素细胞内黑色素含量降低。结论:溶酶体水解酶可能参与皮肤角质形成细胞对黑色素的降解,异甘草素、异欧前胡素干预促进溶酶体酶活性的变化,进而促进黑色素的降解,且二者最适浓度为4ug/ml。
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