水痘突破性病例病毒分子生物学分析及水痘疫苗有效性研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:Amjf123456
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目的:1、采用分子生物学方法,利用聚合酶链反应(PCR)和脱氧核糖核酸(DNA)测序,取曾经接种过水痘疫苗并又患水痘者的皮肤破损处水疱液,通过分离、鉴定后获得的水痘-带状疱疹病毒(VZV)分离株,并对VZV ORF62基因进行研究分析,由此区分感染是由V-Oka疫苗株还是野毒株引起的,同时了解造成突破性水痘的原因。2、应用FAMA(膜抗原荧光抗体法)对临床收集的健康人群接种水痘疫苗前(0d)血清及接种水痘疫苗后(42d)双份血清进行分析,研究人群VZV抗体几何平均滴度在疫苗接种前后的差异,同时验证接种疫苗的有效性及安全性,为水痘疫苗免疫防控提供科学依据。方法:1、采集临床诊断为水痘患者的皮肤疱疹液共7例,将其接种到人胚胎成纤维细胞(MRC-5),经过病毒分离、鉴定后,扩增病毒,提取VZV临床分离株和V-Oka疫苗株的基因组DNA。通过PCR扩增VZV开放读码框(ORF)62部分基因片段,并利用基因测序的方法对PCR产物进行测序分析,结果与V-Oka疫苗株和野毒株基因序列做对比,从而确定临床分离株是V-Oka疫苗株还是野毒株。2、招募1-12岁健康儿童共530名,采用随机、对照、双盲方法,随机分成两组,以VZV感染细胞作抗原、FITC标记的羊抗人IgG为二抗,应用膜抗原荧光抗体(FAMA)法检验血清中特异性VZV抗体情况,进行疫苗免疫前及免疫后抗体水平分析及国内外水痘疫苗免疫效果对比,并验证水痘疫苗的有效性及安全性。结果:成功获得重组质粒,并成功分析出引起水痘突破性病例的患者中仅有1例分离的病毒是既有疫苗株也有野毒株的混合感染,其它突破性病例均为野毒株感染。水痘疫苗接种前,通过FAMA法检测接种者体内抗VZV水平,成功区分出易感者与非易感者;水痘疫苗接种中易感者与非易感者在接种国产水痘疫苗与进口水痘疫苗其GMTP>0.05。国产水痘疫苗与进口水痘疫苗在安全性对比中在瘙痒与发热方面P<0.05,其他P>0.05。结论:成功分析出1例引起水痘突破性病例原因是疫苗株和野毒株的混合感染,成功统计对比出水痘疫苗接种前后抗体水平有显著性差异,在接种国产水痘疫苗与进口水痘疫苗免疫原性是无显著差异,但安全性方面国产水痘疫苗接种后发生瘙痒与发热症状少于进口水痘疫苗。
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