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目的: 通过研究复方葡萄籽胶囊对实验性黄褐斑小鼠体内SOD、MDA、GSH-PX活力的影响,探讨复方葡萄籽胶囊抗氧化作用机制,优选最佳配方比;同时测定复方葡萄籽胶囊中丹参素与原花青素的含量。为进一步研制开发成为防治黄褐斑的新型保健食品提供实验数据,亦为今后质量标准制定提供依据。 方法: 1、雌性昆明种小鼠50只,随机分为空白组、模型组、复方葡萄籽胶囊高、中、低剂量组,共5组,每组10只。给药组分别用195、130和65 mg/kg复方葡萄籽胶囊灌胃,空白组与模型组按体重用一定体积双蒸水灌胃;模型组与给药组同时用10mg·kg-1黄体酮注射大腿根部,每日1次,每周6次,两侧交替;背部脱毛(面积为1.5 cm×1.5 cm),置光毒仪中于320 nm波长紫外线下照射20 min,每日1次,每周6次。30d后取肝脏,制备血清和肝匀浆,测定小鼠血清肝脏各指标。 2、通过高效液相色谱法(HPLC)测定丹参素含量。胶囊内容物精密加入50%甲醇25 mL超声处理30 min放冷后称定质量,并用50%甲醇补足减失的重量。以甲醇-1%冰醋酸(5∶95)为流动相等度洗脱色谱柱为Eclipse Plus C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱,;流速为1.0 mL·min-1,进样量为10μL;柱温30℃;检测器为二极管阵列检测器,波长281 nm。理论板数按丹参素钠峰计应不低于4000。 3、铁盐催化比色法测定原花青素含量。精确称取样品1.000 g左右于100 mL容量瓶中,加入适量甲醇,超声处理10 min,定容,离心备用。精密吸取样品待测液1 mL于10 mL具塞试管中,加入0.2 mL2%NH4Fe(SO4)2.12H2O溶液和6mL酸性正丁醇溶液。95℃的水浴中加热反应40 min,取出,于冰水中迅速冷却,溶液显红色,以空白管作对照,紫外可见分光光度计550 nm处测定其吸光度。由标准曲线回归方程算出含量,按其稀释倍数求得样品中原花青素总含量。 结果: 1、小鼠黄褐斑模型血清中SOD、GSH-PX活性明显降低、MDA增加,低、中、高三个剂量组分别给药后,与模型对照组相比,给药组均表现出明显改善作用,中、高剂量组与模型组比较有显著性(p<0.05),并具有剂量依赖性,同时中、高剂量组复方葡萄籽胶囊可以明显升高小鼠肝脏的SOD活力,降低MDA水平(p均<0.05)。 2、HPLC法测定丹参素含量结果:含量测定在11.3μg/mL-226μg/mL范围内线性关系良好,线性方程为y=7.351x-18.88(r=0.9954),平均回收率为99.77%,RSD=0.92%(n=6)。样品平均含量为4.2139 mg/g,三批样品中含量相对标准偏差RSD=0.4652%。 3、铁盐催化比色法测定原花青素含量结果:含量测定在47.5μg/mL-984.8μg/mL范围内线性关系良好,最小二乘法计算得到原花青素浓度-吸光度线性方程为y=0.001x+0.023(r=0.9992),平均回收率为99.06%(n=9)。样品平均含量6.3958 g/100 g。显色30 min内含量测定无差异,三批样品测定含量相对标准偏差RSD=1.4409%。 结论: 复方葡萄籽胶囊各三剂量组可以明显提高小鼠血和肝脏中SOD、GSH-PX活力,降低MDA含量,表明复方葡萄籽胶囊胶囊具有良好的抗氧化作用,对黄体酮与紫外线诱导的小鼠黄褐斑模型具有良好的防治作用。同时表明黄褐斑的发病原因是多方面的,与体内抗氧化失衡与外界紫外线刺激均有联系。 含量测定结果显示,复方葡萄籽胶囊有效成分稳定,为今后保健食品开发的质量控制提供了科学依据。