论文部分内容阅读
第一部分健脾消积方含药血浆对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响目的:探讨健脾消积方含药血浆对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响,为后续进一步研究提供实验依据。方法:将30只SD大鼠随机分为健脾消积方组及空白对照组,每组15只,分别以大鼠灌胃剂量为27.2g/kg,q12h,连续6天、等量生理盐水灌胃后,过滤、离心获取其血浆。分别以10%、15%、20%健脾消积方含药血浆作用于生长对数期肝癌HepG2细胞作为实验组,同时以等浓度的大鼠空白血浆处理HepG2细胞设为空白对照组。各分组细胞分别培养24h、48h、72h后,以CCK-8法检测HepG2细胞的增殖情况。取经上述处理后的细胞以transwell方法实验健脾消积方含药血浆对人肝癌HepG2细胞迁移的影响。结果:CCK8实验结果显示不同浓度含药血浆组及作用不同时间对人肝癌HepG2细胞增殖能力的影响的差异均有统计学意义（F组间=81.77,P组间=0.000）,其中各浓度含药血浆在24h、72h的吸光度均高于相对应浓度的空白血浆组（P<0.05）,15%浓度含药血浆组、20%浓度含药血浆组在48h的吸光度均有低于空白血浆组（P<0.05）,各分组的吸光度均有随时间延长而升高的趋势（F时间=2996.524,P时间=0.000）;分组与时间有交互效应（F交互=18.791,P交互=0.000）,含药血浆组仅于48h时的抑制率>0,15%浓度含药血浆组、20%浓度含药血浆组抑制率高于10%含药血浆组,但3组的抑制率相比无统计学差异（F=1.566,P=0.284）。迁移检测结果:含药血浆组迁移细胞数为（97.67±14.20）个,低于的空白血浆组为（144.33±10.69）。结论:健脾消积方含药血浆对肝癌HepG2细胞增殖、迁移具有抑制作用第二部分健脾消积方含药血浆对肝癌HepG2细胞TGF-β1的影响目的:初步探讨健脾消积方含药血浆对肝癌HepG2细胞生物学功能影响的机制方法:以15%健脾消积方含药血浆作用于生长对数期肝癌HepG2细胞作为实验组,同时以等浓度的大鼠空白血浆处理HepG2细胞设为空白对照组。各分组细胞分别培养48h后。应用荧光定量PCR法观察健脾消积方含药血浆对人肝癌细胞HepG2的TGF-β1在mRNA水平上的影响,用Western Blot法观察健脾消积方含药血浆对人肝癌细胞HepG2的TGF-β1在蛋白水平上的影响。结果:15%浓度健脾消积方含药血浆作用HepG2细胞48h后,对照组TGF-β1的mRNA的相对表达量为0.994±0.104,高于实验组0.797±0.023（t=3.200,P=0.033）,差异具备统计学意义（P<0.05）;15%浓度健脾消积方含药血浆作用HepG2细胞48h后,TGF-β1的蛋白表达量较对照组有所下调。结论:健脾消积方含药血浆作用HepG2细胞生物学功能影响的机制可能与健脾消积方含药血浆可下调肝癌HepG2细胞的TGF-β1在mRNA、蛋白水平上的表达。第三部分健脾消积方含药血浆对裸鼠移植瘤生长的影响目的:探讨健脾消积方含药血浆在体内对HepG2人肝癌细胞的裸鼠移植瘤的成瘤能力的影响。方法:消化收集对数期生长的HepG2细胞,调整细胞浓度为5×107个/ml。将以上制备好A组,以15%浓度空白血浆的PBS共200ul;B组,以1880ug/ml健脾消积方冻干粉的PBS 200ul;C组:以15%浓度含药血浆的PBS 200ul用于接种裸小鼠的HepG2各组细胞悬液,于裸小鼠腋下注射入HepG2细胞悬液制成动物实体瘤模型。正常喂养29天。观察裸鼠成瘤情况,于第30天尽可能完整无缺地剥离裸鼠的瘤组织并记下所称量的重量,记下各瘤组织的重量,拍照。成瘤率=（成瘤裸鼠数/试验组裸鼠数）×100%。western blot测TGF-β1的蛋白表达。结果:实验结果表明,健脾消积方含药血浆组、冻干粉组裸鼠一般情况好于对照组,不良表型好于对照组。营养状况健脾消积方含药血浆组、冻干粉组好于对照组,健脾消积方含药血浆组、健脾消积方冻干粉组23.34±1.73g、22.45±1.23g显著大于对照组20.56±2.82g（F=5.19,P=0.015）,但是健脾消积方含药血浆组、健脾消积方冻干粉组之间无明显差异（P=0.91）,如图3;用药结束后,健脾消积方含药血浆组、健脾消积方冻干粉组、对照组净瘤质量分别为0.91±0.16g、0.96±0.17g、1.63±0.27g;健脾消积方含药血浆组、健脾消积方冻干粉组净瘤质量明显小于对照组（F=28.42,P=0.000）,健脾消积方含药血浆组、健脾消积方冻干粉组对移植瘤生长抑制率分别为44.17%、41.10%,健脾消积方含药血浆组、健脾消积方冻干粉组净瘤质量无统计学差异（P=0.63）。Western blot测瘤组织TGF-β1在蛋白水平的表达下调。结论:在体内实验中,健脾消积方含药血浆具有抑制HepG2人肝癌细胞移植瘤的成瘤能力的作用,这和体外实验结果相一致。