肠缺血再灌注是很多临床常见疾病发生的病理生理过程,进一步发展可以导致更严重的疾病,例如,多器官功能障碍综合征和全身炎症反应综合征。肠粘膜屏障的损伤是肠缺血再灌注损伤最为重要的环节。肠粘膜屏障由化学屏障、机械屏障、免疫屏障及生物屏障构成,其中机械屏障是肠粘膜屏障的根本。肠粘膜上皮细胞死亡发生的主要方式是细胞凋亡,约占细胞死亡总数的80%。在肠缺血再灌注发生发展的过程中,细胞凋亡是非常重要的环节。肠粘膜细胞凋亡的增加与肠缺血再灌注损伤密切相关。大量的细胞凋亡造成肠粘膜屏障功能受损,上皮细胞通透性增高,内毒素和肠内细菌移位。已有的研究证实内质网应激与细胞凋亡发生密切相关,内质网应激途径是细胞凋亡途径之一。内质网应激途径可能参与了缺血再灌注肠粘膜屏障的损伤,是缺血再灌注肠粘膜损伤的重要机理。大黄素是来自蓼属、大黄属等多种中药中提取的有效成分,已有的研究证实大黄素可以明显减少TNF-α、NO的释放,同时降低中性粒细胞的活化及聚集,减少氧自由基的过度生成,从而抑制过度炎症反应,对缺血再灌注损伤产生保护作用。我们推测大黄素可能通过抑制内质网应激,从而减少肠缺血再灌注造成的肠粘膜的细胞凋亡和紧密连接的破坏,对缺血再灌注肠粘膜屏障的损伤产生保护作用。本实验采用大鼠肠缺血再灌注模型,观察大黄素对肠缺血再灌注肠粘膜细胞凋亡及紧密连接破坏的影响,观察大黄素对肠缺血再灌注肠粘膜细胞内质网应激蛋白的影响,探讨大黄素保护缺血再灌注肠粘膜屏障的机理,为临床预防和治疗肠缺血再灌注提供理论依据。实验一大黄素对缺血再灌注大鼠肠粘膜屏障损伤的保护作用目的观察大黄素对肠缺血再灌注大鼠肠粘膜屏障的影响。方法48只雄性SD大鼠,随机分为假手术(S)组、模型(IR)组、模型+生理盐水(IRS)组和模型+大黄素(IRE)组。IRE组给予40mg/(kg·d)大黄素灌胃,IRS组给予等量生理盐水灌胃,连续7d,于第7d给药2h后,制备肠缺血再灌注模型。光镜和透射电镜下分别观察各组小肠病理改变和紧密连接损伤,并进行Chiu’s评分。用TUNEL法检测肠粘膜细胞凋亡指数。Western Blot半定量法测定肠粘膜Claudin-1、Occludin蛋白含量。激光共聚焦显微镜观察肠粘膜Claudin-1、Occludin蛋白分布。结果IRE组与IR组、IRS组相比,小肠病理损伤和紧密连接结构破坏明显减轻、Chiu’s评分降低(P<0.05)、细胞凋亡指数降低(P＜0.05)、Claudin-1、 Occludin蛋白含量增加(P<0.05)、共聚焦显微镜观察肠粘膜Claudin-1、Occludin蛋白分布增加。结论大黄素可以缓解肠缺血再灌注造成的肠道损伤、减少肠粘膜细胞凋亡、保护肠上皮细胞间紧密连接,对肠粘膜屏障具有保护作用。实验二大黄素对缺血再灌注大鼠肠粘膜屏障损伤保护作用的机理研究目的观察大黄素对大鼠肠缺血再灌注(IR)肠粘膜内质网应激的影响,研究大黄素对缺血再灌注肠粘膜屏障损伤的保护作用机理。方法48只雄性SD大鼠,随机分为假手术(S)组、模型(IR)组、模型+生理盐水(IRS)组和模型+大黄素(IRE)组。IRE组给予40mg/(kg·d)大黄素灌胃,IRS组给予等量生理盐水灌胃,连续7d,于第7d给药2h后,制备肠缺血再灌注模型。Western Blot半定量法测定肠粘膜内质网应激蛋白GRP78、 Caspase-12蛋白含量。结果IR组、IRS组与S组相比,内质网应激蛋白GRP78, Caspase-12蛋白含量增加(P<0.05). IRE组与IR组、IRS组相比,内质网应激蛋白GRP78、 Caspase-12蛋白含量减少(P<0.05)。结论缺血再灌注可以造成肠粘膜细胞内质网应激蛋白的增加,而大黄素可以减少这种因缺血再灌注造成的肠粘膜内质网应激蛋白的增加,通过抑制内质网应激途径,对肠粘膜屏障损伤产生保护作用。