论文部分内容阅读
目的:胃癌作为消化系统最为常见的肿瘤,具有高发病率和高致死率的病理特征,严重的威胁着人们的生命健康。胃癌的病理机制是一个复杂多变的过程,目前在胃癌的治疗过程中,由于缺乏早期的生物学标志物的筛选或检测胃癌的有效手段受限,胃癌常至晚期才得以被确诊。传统的胃癌治疗中,手术治疗结合放化疗是最为主要的治疗手段。但是,较大的毒副作用使其应用受限。因此,有必要寻找开发低毒、高效的药物。本研究通过检测中药红花的活性提取物羟基红花黄色素B(Hydroxy safflower yellow B,HSYB)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,并初步探寻HSYB诱导胃癌细胞凋亡的分子机制,为从天然产物中筛选抗肿瘤药物提供理论基础。方法:(1)利用MTT法检测0、5、15和25 μg/mL HSYB对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;(2)利用Hoechst 33258染色检测0、5、15和25μg/mL HSYB处理后对人胃癌SGC-7901细胞形态改变的影响;(3)利用集落生成实验检测0、5、15和25 μg/mL HSYB对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;(4)利用Annexin V-FITC/PI双染法检测0、5、1 5和25 μg/mL HSYB对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响;(5)用JC-1荧光染料染色后检测0、5、15和25 μg/mL HSYB作用后对人胃癌SGC-7901细胞线粒体膜电势的影响;(6)利用蛋白免疫印迹法检测0、5、15 和 25 μg/mL HSYB 作用后对凋亡相关蛋白 Caspase-3,Caspase-9,ERK,p-ERK,Bax,Bxl-2表达水平的影响。结果:(1)MTT结果显示,5、15和25 μg/mL HSYB作用人胃癌SGC-7901细胞后,可明显地抑制细胞增殖,并呈现出剂量依赖性;(2)Hoechst 33258荧光染色结果显示,15和25μg/mL HSYB作用于人胃癌SGC-7901细胞后,细胞核内荧光亮度增加,并且与药物的剂量成正相关;(3)集落形成实验结果显示,15和25μg/mL HSYB作用人胃癌SGC-7901细胞后,对细胞集落克隆形成具有明显的抑制作用;(4)Annexin V-FITCPI双染法结果显示,5、15和25μg/mL HSYB作用于人胃癌SGC-7901细胞后,细胞凋亡率明显增加且与药物浓度的上升呈正相关关系;(5)同时,JC-1染色结果表明,线粒体膜电位(ΔΨm)随着HSYB剂量增加而逐渐递减;(6)Western Blot结果显示,5、15和25 μg/mL HSYB作用于人胃癌SGC-7901细胞后,HSYB可上调促凋亡相关蛋白Caspase-9,Caspase-3,Bax的表达水平;使抗凋亡相关蛋白Bcl-2,ERK,p-ERK的表达水平明显下调。结论:HSYB能够抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并通过通过Bax/Bcl-2/ERK信号通路诱导其凋亡。