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随着抗体制备技术、荧光示踪标记技术、色谱质谱技术的不断发展,小分子化合物的新的检测模式和检测方法也不断涌现。氨基糖普类(AGs)抗生素是一类含有氨基糖与氨基环醇结构的药物,在我国畜牧养殖中广泛用于奶牛乳房炎的治疗和促生长作用,对该类抗生素在动物性食品中的残留监控也是我国食品安全工作的重要组成部分。因此,以现有检测方法为基础,结合新的检测模式或新的示踪材料,开展AGs类抗生素快速筛选和仪器确证新方法的探索研究具有非常重要的意义。本研究制备了安普霉素、庆大霉素和卡那霉素的酶标抗原,建立了可视化凝胶ELSA快速检测方法。其中,安普霉素可视化凝胶ELSA方法灵敏度为0.5μg/L,对猪肉、鸡肉的Cut-off值为3μg/kg,对牛奶的Cut-off值为3μg/L,对猪肝、鸡肝的Cut-off值为10μg/kg,方法采用二步法,检测时间为20min；同步检测庆大霉素和卡那霉素的可视化凝胶ELISA方法的灵敏度为2.0μg/L,对牛奶的Cut-off值为6μg/L,方法采用一步法,检测时间为15min。制备了庆大霉素和卡那霉素荧光微球示踪物,建立了荧光微球免疫层析检测方法。其中,庆大霉素检测方法为定性方法,方法灵敏度为100μg/L,牛奶样品Cut-off值为100μg/L,方法采用微孔垂直上样法,检测时间为20min；卡那霉素检测方法为定量方法,方法的IC50值为24.8μg/L,线性范围(以20%～80%抑制率对应的浓度计算)为9.5～100μg/L,最低检出限(以10%抑制率对应的浓度计算)为5μg/L。以25、50和100μg/L浓度添加,牛奶中的平均添加回收率在78.4%～92.7%之间,变异系数在10.8%～12.4%之间。本研究尝试采用亲水作用色谱(HILIC)模式,利用低密度键合C18柱对AGs类抗生素进行分离测定,建立了牛奶中12个AGs类抗生素的UPLC-MS/MS检测方法。方法采用常见的乙腈和甲酸水作为流动相,梯度洗脱条件,12种AGs类抗生素均得到良好的保留和洗脱,出峰时间在1min以后,峰型尖锐对称,整个反应条件中均没有使用离子对试剂。该方法的LOD为为10～50μg/L,LOQ为20～100μ/L,在20～5000pg/L范围内线性关系良好。以20～1000μg/L浓度添加试验表明,样品中的平均添加回收率在60.9%～109.2%之间,日内变异系数在4.6%～14.8%之间,日间变异系数在6.0%～16.2%之间。综上所述,本研究建立的AGs类抗生素残留检测快速筛选和仪器确证的方法,其方法性能符合残留检测的需求,丰富了AGs类残留检测方法体系,为动物性食品中AGs类抗生素的残留监测提供了有效的技术手段。