乙酰胆碱(Acetylcholine, Ach)是一种重要的神经递质,广泛分布于原核和真核细胞中。作为胆碱能系统的主要组成部分之一,乙酰胆碱在中枢神经系统及非神经系统中都发挥着重要的作用。神经组织中的乙酰胆碱作为神经递质介导神经元与效应细胞之间有效地进行信息交换,它的含量不仅调节着突触的可塑性,同时也跟认知活动密切相关。研究表明,神经组织中的乙酰胆碱影响着人类的记忆力跟学习能力,这也就使得它的含量可以作为诊断精神分裂症、阿尔茨海默症、帕金森病等这些神经相关疾病的重要指标之一。存在于非神经组织中的乙酰胆碱不但可以调节细胞的表型变化,也跟炎症等疾病有关。因此,建立乙酰胆碱的检测体系不仅是理论研究的迫切需要,也在临床研究中有着举足轻重的作用。漆酶作为多铜类氧化酶家族的成员之一,其含四个铜原子的催化活性中心受到了研究者的广泛关注。自从它被发现并分离纯化之后,由于其氧化性而引发的其在各个领域的运用层出不穷。到目前为止,漆酶的应用主要体现在造纸工业中的生物制浆,食品工业中面包的发酵和酒类芳香性和外观的修饰,纺织工业中染料的脱色以及环境保护中的生物修复等诸多领域。漆酶以酚类物质作为催化底物,其最大的优势在于作用的底物要求特异性不是很强,并且漆酶的来源也非常广泛,可以从高等植物、细菌及真菌中分离纯化得到,这就使得漆酶具有广阔的应用前景和发展潜力。本试验以传统的1uminol-H2O2作为化学发光的体系,引入漆酶作为化学发光的催化剂,构建了一种简单、成本低廉且易于操作的乙酰胆碱(Ach)检测方法。其基本过程如下：通过乙酰胆碱在乙酰胆碱酯酶(AchE)和胆碱氧化酶(ChOx)的作用下分解产生的过氧化氢这种活性分子,再利用漆酶对于过氧化氢-鲁米诺体系的催化进行化学发光的信号检测。通过条件的优化,我们在最优试验条件下得到了比较好的线性工作曲线,该方法在Ach浓度为2.5-250μmol/L之间有良好的线性关系,其检测线为2μmol/L(S/N=3)。同时,我们用75μmol/L的Ach做了11次重复试验,其相对标准偏差为3.2%,说明该方法具有良好的重复性。另外,用谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、葡萄糖、抗坏血酸、多巴胺、乳酸等七种物质进行了特异性及干扰性试验的研究,结果发现本方法对于Ach具有很好的特异性。