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鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)引起的鸡病毒性呼吸道疾病,可引起鸡死亡或产蛋下降而造成严重的经济损失。2015年安徽省池州某鸡场120日龄蛋鸡发生疑似鸡传染性喉气管炎,该场存栏5000只,临床症状为呼吸困难,发病率为60%,死亡率为60%,为了对该场发病情况进行确诊,本研究采集病鸡喉头气管组织及其分泌物,剪碎加入3倍体积无菌0.2MPBS充分研磨,反复冻融三次后离心取上清加入青-链霉素(500U/mL)4℃孵育过夜,置于-80℃冰箱备用。提取病鸡喉头气管及其分泌物总DNA并根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒gD基因设计合成一对特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出1134bp大小片段,.制备的组织液上清经鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)途径接种10日龄SPF鸡胚,120h后打开鸡胚,发现在鸡胚CAM上发现典型痘斑,收集病变鸡胚痘斑和尿囊液,充分研磨,反复冻融并离心取上清按照相同途径连续接种鸡胚三次,取第4代鸡胚分离毒作为种毒,保存于-80℃;将种毒通过滴鼻、点眼的方式接种5日龄健康麻羽肉鸡,每只102EID50作为试验组,并使用同等剂量的无菌PBS设置阴性对照,连续观察,结果发现:攻毒3d后试验组出现采食量下降,呼吸困难,眼结膜坏死等症状,第4～5d症状加重并出现两只雏鸡死亡,第9d开始预后;而同时对照组无任何症状;剖检病死鸡发现其喉头气管出血,盲肠扁桃体肿大,并可从病死鸡喉头气管及其分泌物中检测到病毒。结果证实分离到一株鸡传染性喉气管炎病毒,命名为CZ-ILTV16株。以第4代鸡胚分离毒为材料提取病毒DNA,并扩增gD基因,胶回收纯化后克隆至pMD18-T载体,转化入DH5α感受态细胞,挑取单克隆鉴定正确后进行测序,结果发现与GenBank上已发表gD基因序列同源性在99%以上,基因进化树分析结果发现,分离毒处于独立分支,且与Serva株的亲缘性较近;