黄曲霉毒素B1单克隆抗体和单链抗体的制备

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黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是黄曲霉毒素中毒性最强的一种毒素,国际上以黄曲霉毒素的毒性作为10,000的基准,来比较其它物质的毒性。黄曲霉毒素的危害性主要表现为强烈的毒性和致癌性,由于它在花生、玉米等食品中广泛存在,因此严重危害了人们的身体健康。在现代社会里,随着人们生活水平的提高,人们日益关注食品安全问题,食品安全已引起各国政府的严重关注,欧盟在2000年就提出了世界上最严格的安全标准和检验标准,其中AFB1为2μg/kg,总黄曲霉毒素为4 μg/kg。因此,也形成了新贸易壁垒,对我们国家的农产品出口造成了重大的经济损失。 本研究以AFB1-BSA免疫小白鼠,经过三次免疫以后,用间接ELISA法检测小鼠血清,选取血清效价高达16000的小鼠,在四免后取效价最高的小鼠的脾脏细胞,利用50%PEG4000将其与SP2/0细胞进行融合,制备杂交瘤细胞。经过对培养上清的筛选和杂交瘤细胞的克隆化,最终得到能分泌黄曲霉毒素B1抗体的杂交瘤细胞株0G9。再将单克隆杂交瘤细胞系提取RNA,经过RT-PCR获得抗体可变区基因,利用一柔性肽段(Linker)连接形成单链抗体(single chain fragments variable,scFv),后应用基因工程方法,将scFv与噬菌粒载体pCANTAB-5E连接,转化大肠杆菌TG1,获得单链抗体噬菌体文库和利用噬菌体展示(Phage display)技术对抗体库进行了4轮淘选(panning),获得了AFB1特异性的单链抗体,为进一步的抗体工程奠定了基础。
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