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目的：构建针对婆罗双树样基因4(SALL4)的特异性shRNA干扰载体,并转染THP-1细胞,以期为更深入了解SALL4对白血病的作用,为后续研究提供试验工具。方法：设计四条针对不同靶点的SALL4特异性siRNA和一条阴性干扰siRNA,分子克隆方法构建pGPU6／GFP／Neo／SALL4 shRNA干扰载体,转染THP-1细胞,比较未转染细胞,阴性干扰转染细胞和4条SALL4 shRNA转染细胞的SALL4表达情况,找出干扰效率最好的SALL4 shRNA。结果：4种SALL4shRNA均能有效转染THP-1细胞,real time PCR与western blot结果均显示针对靶点mRNA-1122的pGPU6／GFP／Neo／SALL4 shRNA-B干扰效果最佳,SALL4表达减少量最多(P<0.05)。结论：成功构建SALL4 siRNA干扰载体,可选择SALL4 shRNA-B载体进一步完成对SALL4基因功能的研究工作。目的：了解SALL4 RNA干扰对白血病细胞THP-1生物学行为的影响。方法：构建针对SALL4的特异性shRNA干扰载体,并转染THP-1细胞,MTT法检测空白对照细胞,干扰载体转染细胞和阴性载体转染细胞的细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,比较各组细胞的变化与区别。结果：SALL shRNA载体转染的THP-1细胞在增殖能力上相对空白对照细胞及阴性对照细胞有明显下降,细胞凋亡率相对对照组细胞有明显上升,有丝分裂M期细胞比例减少。结论：SALL4 RNAi后的THP-1细胞肿瘤细胞特征明显被抑制,SALL4对维持THP-1细胞恶性生物学特征有重要作用,SALL4可能是白血病发生发展过程中发挥重要作用的一种癌基因。目的：研究化疗药物对THP-1白血病细胞SALL4表达的影响,了解SALL4在化疗药物杀伤白血病细胞机制中的作用,以期为证实SALL4是治疗白血病的可能靶位提供实验依据。方法：MTT法及改良寇氏法分别计算得出化疗药物Ara-C和DNR体外作用于THP-1细胞的半数抑制浓度(IC50),以IC50浓度的Ara-C和DNR在不同时间点作用于THP-1细胞,使用real time PCR检测SALL4的表达变化。结果：IC50浓度的Ara-C和DNR在不同时间点作用于THP-1细胞后,SALL4 mRNA的表达均较未干预组有明显下降,差别具有统计学意义,而且作用强度随时间延长而增加。结论：SALL4可能是Ara-C和DNR杀伤THP-1细胞的作用靶位之一,SALL4作为白血病治疗靶点具备一定的实验基础。目的：研究SALL4与癌基因survivin及抑癌基因PTEN的关系,了解survivin及PTEN是否为SALL4作用机制中的下游效应基因。方法：使用RNA干扰技术将THP-1细胞内的SALL4表达抑制,同时用real time PCR及Western Blot检测此时THP-1细胞癌基因survivin及抑癌基因PTEN的表达情况,并与空白对照组和阴性干扰组survivin及PTEN的表达相比较。结果：在SALL4表达抑制之后,THP-1细胞的survivin表达也同时减少,PTEN表达则同时增加,但是阴性干扰组THP-1细胞的survivin与PTEN表达也出现上述改变。空白对照,阴性干扰与SALL4 RNA干扰3组survivin及PTEN的表达差异均有统计学意义(两两比较P<0.05)。结论：SALL4的表达与survivin及PTEN之间存在一定的调控关系,但是survivin及PTEN是否是SALL4的下游效应基因有待于进一步研究明确。