【摘 要】
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目的通过探讨脱水式热暴露对大鼠海马神经元的影响,研究自噬及其潜在机制。方法本研究将雄性Sprague Dawley大鼠随机分为空白对照组（CON）,热暴露组（HE）和脱水式热暴露组（DHE）。每个大组又分为1d,4d,7d三个亚组,之后按相应天数造模,DHE组每天脱水热暴露8h,之后饮食自由。探讨不同程度的脱水式热暴露对大鼠生理状态及海马神经元的影响,检测各组大鼠的食物消耗量、饮水消耗量和体重增加
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目的通过探讨脱水式热暴露对大鼠海马神经元的影响,研究自噬及其潜在机制。方法本研究将雄性Sprague Dawley大鼠随机分为空白对照组（CON）,热暴露组（HE）和脱水式热暴露组（DHE）。每个大组又分为1d,4d,7d三个亚组,之后按相应天数造模,DHE组每天脱水热暴露8h,之后饮食自由。探讨不同程度的脱水式热暴露对大鼠生理状态及海马神经元的影响,检测各组大鼠的食物消耗量、饮水消耗量和体重增加量等变化,检测各组大鼠血压和心率的变化,水迷宫、H＆E染色和Nissl染色检测大鼠的海马神经元功能、形态的变化。在观察到7d造模对大鼠机能影响变化最大后,后续实验均在此基础上进行。通过透射电镜检测自噬小体,Western blot检测自噬及通路相关蛋白的变化,免疫组织化学（IHC）检测自噬相关因子的改变。最后我们通过加入PI3K的抑制剂LY294002,将SD大鼠随机分为空白对照组（CON）,空白对照+LY294002组（LY）,脱水式热暴露组（DHE）,脱水式热暴露+LY294002组（DHE+LY）,检测通路蛋白和自噬蛋白的变化。结果1.对大鼠食物量、饮水量、体重增加量的变化:相比1d,4d,7d造模对大鼠的改变明显。4d时,与CON组相比,HE组和DHE组的饮水消耗量明显增加（P＜0.05）,DHE组的食物消耗量和体重增长量明显下降（P＜0.05）;7d时HE组和DHE组的饮水消耗量明显上升（P＜0.05）,食物消耗和体重增加量明显下降（P＜0.05）,且脱水式热暴露加重了这种变化（P＜0.05）。2.对大鼠血压和心率的影响:4d造模后,DHE组的收缩压（SBP）、平均动脉压（MAP）、舒张压（DBP）、和心率（HR）均明显上升（P＜0.05）,7d造模后,两个热暴露组的血压和心率都有明显变化（P＜0.05）,且脱水式热暴露组变化更明显（P＜0.05）。3.对大鼠海马的影响:水迷宫实验显示,7d造模后大鼠的学习记忆能力下降,且脱水式热暴露加重了这种变化。H＆E染色、Nissl染色显示大鼠海马神经元在7d造模时损伤最严重,HE组海马神经元形态受损,神经元数量减少（P＜0.05）,尼氏体溶解或消失,尼氏体面积减少（P＜0.05）,DHE组能够加重这种改变。透射电镜显示海马神经元超微结构在7d造模后损伤严重且有自噬小体的形成。4.Western blot结果显示,7d造模后,与CON组比较,HE组自噬相关蛋白LC3II/I比值增加,Beclin1、Atg5和Atg12蛋白表达显著上升（P＜0.05）,p62的表达显著下降（P＜0.05）,Atg7有上升趋势,与自噬关系密切的凋亡蛋白Bax表达上升（P＜0.05）,Bcl-2表达下降（P＜0.05）,而DHE组能够加重上述改变（P＜0.05）。5.IHC染色显示,与CON组相比,LC3、Beclin1、Bax的阳性细胞面积增多（P＜0.05）,p62、Bcl-2的阳性细胞面积下降（P＜0.05）,而DHE组能够加重上述改变（P＜0.05）。6.对通路蛋白的检测显示,与CON组相比,HE组的p-PI3K/PI3K、p-m TOR/m TOR的表达显著下降（P＜0.05）,p-AKT/AKT有下降趋势,而DHE组能够显著加重上述改变,提示我们脱水式热暴露可能是抑制了该通路。7.加入抑制剂后,对通路蛋白和自噬蛋白检测发现,脱水式热暴露可能通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路,引起自噬加重。结论1.脱水式热暴露在7d时对机体行为及功能改变明显,大鼠海马神经元损伤严重。2.脱水式热暴露对大鼠海马神经元引起的损伤与自噬增强有关。3.脱水式热暴露引起大鼠海马神经元自噬增强,可能是通过抑制PI3K/AKT/m TOR这一信号通路来实现的。
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