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甲状腺激素对哺乳动物的脑发育起重要作用,围生期甲状腺激素缺乏将造成不可逆的脑损伤,引起严重的感觉、运动障碍和智力低下,且发病时间、严重程度及开始甲状腺激素治疗的时间等因素均与脑损害的发生和恢复密切相关。甲状腺激素调节脑发育的机制迄今尚未完全阐明,但不外是通过影响神经细胞的增值与凋亡两条途径。以往研究大多集中于对细胞增值、迁移和分化的影响,而对细胞凋亡的研究很有限。细胞凋亡是神经系统发育过程中的重要环节,参与神经系统的塑形和改建,维持神经结构的正常发育。由于海马结构是参与认知活动的重要中枢,并且与行为情感有关。为此,我们对围生期甲低仔鼠海马神经元凋亡及其机制进行研究,并探索其与行为改变的相关性,以期了解海马神经元凋亡是否参与脑发育阶段甲状腺激素缺乏所致的脑损害,对这一系统的干预可能为甲低性脑损害的防止提供新思路。 第一部分 围生期甲状腺功能低下仔鼠海马神经元凋亡的研究 方法 SD雌鼠12只自孕15天起丙基硫氧嘧啶（PTU）50mg/d灌胃至仔鼠生后15日龄,复制围生期甲低仔鼠模型,生长发育迟缓及血清FT4水平明显下降纳入研究（n=56）,并设同期8只不加任何处理的孕鼠所产仔鼠作为正常对照组（n=56）。应用光镜、透射电镜、DNA-Ladder及TUNEL法观察1、5、10、15日龄甲低组仔鼠海马神经元凋亡,并与同日龄对照组比较。脚左伏.学娜全学夕居戈J结果与同日龄对照组比较,甲低组仔鼠生长发育延迟,体重减轻,血清FT3、FT;下降,TSH增高（均p<0.05）;甲低组仔鼠海马组织光镜下变性神经元增多,透射电镜观察凋亡细胞增多,以上变化以10、巧日龄仔鼠为著;甲低组仔鼠各日龄海马组织均出现不同程度的DNA降解片段,而对照组仅10日龄可见少量DNA降解片段;除1日龄外,其它各日龄甲低组仔鼠海马CA3区TIJNEL阳性细胞增多（均尸<0.05）,以巧日龄为著（与其它日龄比较,均尸<0.05）。第二部分围生期甲状腺功能低下仔鼠海马神经元凋亡机制的研究方法孕SD雌鼠复制巧日龄围生期甲低仔鼠模型纳入研究（n=56）。应用透射电镜观察1、5、10、巧日龄甲低组仔鼠海马神经元线粒体形态的改变;采用westem Blotting法检测海马神经元胞浆中Bel一2及easpase一3 p20蛋白表达量,胞浆及线粒体中Bax、细胞色素C及AIF蛋白的变化,并与同日龄对照组比较 （n=56）。结果与同日龄对照组比较,甲低组仔鼠海马神经元形态改变的线粒体增多 （P<0.05）;胞浆中Bcl一2蛋白表达量下降（均尸<0.05）,Bax蛋白表达量增加（均尸<0.05）,Bcl一2/Bax的比值下降（均尸<0.05）,线粒体中Bax表达增加更为显著 （均P<0.001）;线粒体中细胞色素C表达下降（均尸<0.05）,胞浆中表达增加 （均P<0.05）;线粒体中AIF表达下降（均P<0.01）,胞浆中表达增加（均P<0.001）;胞浆中easpase一3 p20表达增加（均p<0.01）。第三部分围生期甲状腺功能低下仔鼠行为改变及其与海马神经元凋亡的相关 性研究方法SD雌鼠18只自孕15天起丙基硫氧嗜睫（PTU）50mg/d灌胃至仔鼠生后21日龄,复制围生期甲低仔鼠模型,雄性仔鼠纳入研究（n二64）,随机选32只于出生当日起每天腹腔注射T42林留1 009至2旧龄断奶,为T4替代治疗组,余犯只甲低仔鼠未予特殊处理,另设正常对照组雄性仔鼠32只。对21、50日龄甲低组仔鼠分别行斜板、悬吊及旷场实验,对50日龄甲低组仔鼠行避暗及八臂实验,并与脚盯大学娜全学世纷戈同日龄正常对照及治疗组比较。行为学测定后检测血清FT3、FT4及TSH,光镜、电镜及TUNEL观察海马神经元凋亡,分析海马神经元凋亡与行为改变的相关性。结果50日龄三组仔鼠血清F乃、F几及TSH无显著性差异（均P>0.05）。2旧龄三组仔鼠转体时间无显著性差异（均P>0.05）。与正常对照及治疗组比较,21日龄甲低组仔鼠悬吊时间缩短（均P<0.05）,50日龄三组间无显著性差异（均P>0.05）;21及50日龄甲低组仔鼠穿格得分增多、后肢性站立次数及排粪便粒数均减少（均尸<0.01）;50日龄甲低组仔鼠避暗实验中达到学会程度所犯错误次数最多,24小时后记忆潜伏期缩短,差异有显著性（均尸<0.01）;50日龄甲低组仔鼠八臂实验中参考记忆错误（RME）无显著性差异（均P>0.05）,工作记忆错误（WME）增多,差异有显著性（均P<0.01）,跑迷宫时间无显著性差异（均P>0.05）;21、50（60）日龄甲低组仔鼠光镜及电镜下海马神经元变性及凋亡增多,CA3区TUNEL阳性细胞增多（均P<0.05）。50（60）日龄仔鼠海马CA3区神经元凋亡数量与悬吊时间无线性相关（:=0.174,P>0.05）;与穿格得分正相关（:=0.726,尸<0 .01）;与避暗中错误次数正相关（r= 0.805,尸<0.01）,与潜伏期负相关（:=一0.845,P<0.01）;与八臂中的总错误次数正相关（:二0.620,P<0 .05）。结论1.正常仔鼠海马神经元在生后10日龄出现凋亡高峰,可能与发育中的海马 神经元增殖和神经网络形成过程密切相关。2.围生期甲低不仅使海马神经元凋亡程度增加,而且凋亡高峰后移,阻碍了 海马的发育与成熟。3.围生期甲低导致海马神经元Bd一2/Bax比值的下降,促进线粒体释放凋亡 分子细胞色素C和AIF,进而激活下游的casPase一3或直接作用于细胞核, 引起凋亡。4.围生期甲低引起仔鼠运动能力下降、自主活动性增加、适应能力下降、焦 虑?