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目的:缺血性心脏病（ischemic heart disease,IHD）的致死率居全球之首。心肌组织缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤诱导了缺血区心肌梗死。深入研究I/R损伤的病理生理过程,有效保护心肌组织,降低IHD病人死亡率尤为重要。微囊泡（microvesicles,MVs）作为细胞激活或凋亡过程中产生的生物活性物质,在IHD的发生发展中扮演重要角色。本研究提取心肌缺血大鼠循环血中的MVs,探讨其对大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制,为深入认识MVs在I/R损伤中的作用提供必要的实验依据。方法:1.大鼠在体心肌I/R模型的建立及MVs的分离与提取健康雄性Wistar大鼠随机分为2组:（1）假手术（sham）组:心脏冠状动脉左前降支（LAD）下穿线后旷置165 min;（2）I/R组:心脏穿线、稳定15 min后,行心脏LAD30 min缺血/120 min再灌注过程,建立I/R模型。实验过程中连续监测标准Ⅱ导联心电图（ECG）、记录缺血期各类室性心律失常（VA）的发生情况,TTC染色法测定心肌梗死面积,用于评价I/R动物模型。健康雄性Wistar大鼠随机分为2组:（1）假手术（sham）组:心脏LAD穿线旷置45 min后腹主动脉取血;（2）心肌缺血组:心脏LAD穿线、稳定15 min,行LAD缺血30 min后立即自腹主动脉取血。血液应用3.5%枸橼酸钠抗凝,经两步离心得到无血小板血浆后,少部分应用流式细胞术进行MVs计数,剩余部分经超速离心得到MVs,用于后期处理动物。2.心肌缺血大鼠MVs对I/R所致心肌组织损伤的作用健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:（1）sham组:心脏LAD穿线后旷置165min,期间于旷置40 min股静脉注射NS;（2）I/R组;（3）MVs处理组。除sham组,其余两组均于心脏LAD穿线后实施I/R过程。MVs组于缺血25 min自股静脉推注MVs,MVs自大鼠LAD缺血30 min循环血中提取,处理动物剂量为还原体内剂量,即依对MVs重悬液蛋白定量的结果,根据动物体重计算而得。其余两组均以等体积NS自股静脉推注。连续监测标准Ⅱ导联ECG、记录缺血期各类VA的发生情况,分光光度法测定血清乳酸脱氢酶（LDH）活力、ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶MB活力（CK-MB）,TTC染色测定心肌梗死面积、HE染色观察心肌形态学改变。3.心肌缺血大鼠MVs对I/R所致心肌细胞凋亡的影响健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:（1）sham组;（2）I/R组;（3）MVs处理组。各组处理同上一部分。原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡,微量酶标法测定心肌组织caspase 3、9、12活力、Western blot法检测心肌组织Bcl-2、Bax及GRP78、SERCA2、PLB、p-PLB蛋白表达水平。结果:1.大鼠在体心肌I/R模型的建立及MVs的分离与提取I/R组,缺血期ST-段进行性抬高,至缺血30 min达到最高值;室早（VPC）出现时间为5.15±0.96 min,出现个数为237±48;室速（VT）出现时间为7.92±0.81min,持续时间为0.56±0.20 min;VPC与VT的发生率均为100%,VF的发生率为81.5%。梗死区面积（IS）为78.65±6.74 mg,梗死区/危险区（IS/AAR）为39.01±6.07%。循环血经两步离心后流式检测,1μm以下粒子信号占全部信号的99%以上。与sham组比较,缺血30 min循环血中MVs数量明显增加（（15.27±0.99）×105个/μL vs.（12.69±0.52）×105个/μL,P<0.001）。2.心肌缺血大鼠MVs对I/R所致心肌组织损伤的作用I/R及MVs组缺血期ST-段均进行性抬高,至缺血30 min末达到最高值,再灌注后逐渐回落,ST-段变化及缺血期VA发生情况两组间无差别。血清心肌酶LDH及CK-MB测定结果显示,与sham比较,I/R及MVs组缺血30 min及再灌注120 min末均明显升高（P<0.001）,再灌注末变化更为显著（P<0.001）;与I/R组比较,MVs组再灌注120 min明显下降（P<0.001）。经TTC染色发现,与I/R组比较,MVs组IS明显减小（47.61±8.36 mg vs.81.78±5.45 mg,P<0.001）,IS/AAR显著下降（22.49±3.66%vs.38.01±4.74%,P<0.001）,形态学观察显示心肌组织损伤明显减轻。3.MVs对大鼠在体心肌I/R损伤所致心肌细胞凋亡的影响通过对心肌细胞凋亡进行检测发现,与I/R组比较,MVs组心肌细胞凋亡指数（AI）明显降低（22.14±1.89%vs.37.01±1.12%,P<0.001）。与sham组比较,I/R及MVs组心肌组织caspase 3、9及12活力均显著升高（P<0.001）;与I/R组比较,MVs组上述三种酶活力明显下降（20.59±2.38 U/μg vs.36.10±3.24 U/μg,25.00±2.64 U/μg vs.35.10±3.15 U/μg,5.54±0.80 RFU/mg vs.9.84±1.02 RFU/mg,P<0.001）。Western blot结果显示,与sham组比较,I/R及MVs组Bax显著升高、Bcl-2、SERCA2及p-PLB均明显下降,此两组比较,以I/R组变化更为显著（P<0.001）。与I/R组比较,Bcl-2/Bax及p-PLB/PLB比值显著升高（P<0.001）。与sham组比较,I/R组GRP78明显下降（0.34±0.04 vs.0.44±0.02,P<0.01）,MVs组明显升高（0.68±0.07 vs.0.44±0.02,P<0.001）。结论:1.大鼠在体心肌I/R动物模型制备成功。心肌缺血30 min大鼠循环血中MVs数量较对照组显著增加。2.相当于体内剂量LAD缺血30 min循环血中的MVs对大鼠在体心肌I/R损伤有保护作用,能够减少心肌梗死面积,减轻心肌酶LDH和CK-MB的漏出。3.相当于体内剂量LAD缺血30 min循环血中的MVs能够减轻I/R损伤所致的内源性途径心肌细胞凋亡,是通过上调I/R心肌组织Bcl-2、GRP78、SERCA2及p-PLB蛋白表达,下调Bax蛋白表达实现的。