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第一部分:重型肝炎前期动物模型的构建及鉴定目的:构建重型肝炎前期动物模型。方法:不同剂量四氯化碳腹腔注射构建重型肝炎前期小鼠模型;不同剂量四氯化碳腹腔注射构建重型肝炎前期大鼠模型;不同剂量D-氨基半乳糖(D-Gal N)联合内毒素(LPS)腹腔注射构建重型肝炎前期大鼠模型。分别观察肝脏大体改变,病理学改变,血清生化学改变。结果:小鼠不同剂量四氯化碳造模,21只小鼠36小时死亡9只。25mg/kg以下剂量组肝细胞肿胀,如超过50mg/kg剂量,肝组织学就出现亚大块或大块坏死。大鼠不同剂量四氯化碳造模,10只SD大鼠240小时死亡2只,50mg/kg以下剂量肝细胞肿胀,肝组织出现小片坏死,如超过500mg/kg剂量,肝组织学就出现大块坏死。大鼠不同剂量D-Gal N联合LPS造模,12只大鼠240小时死亡4只,D-Gal N 700mg/kg联合LPS 35ug/kg以下剂量肝细胞肿胀,肝组织出现小片坏死,如超过D-Gal N 3500mg/kg联合LPS 175ug/kg剂量,肝组织学就出现大块坏死。结论:1.用四氯化碳建立重型肝炎前期小鼠模型,四氯化碳剂量25mg/kg是合适的,36小时未出现死亡现象,肝组织学及血清生化学变化也符合重型肝炎前期改变。2.用四氯化碳建立重型肝炎前期大鼠造模,四氯化碳剂量50mg/kg是合适的,240小时未出现死亡现象,肝组织学及血清生化学变化也符合重型肝炎前期改变。3.用D-Gal N联合LPS建立重型肝炎前期大鼠造模,D-Gal N 350mg/kg联合LPS 17.5ug/kg是合适的,240小时未出现死亡现象,肝组织学及血清生化学变化也符合重型肝炎前期改变。第二部分:重型肝炎前期动物模型Th17/Treg失衡,糖皮质激素及胸腺肽序列干预对Th17/Treg失衡的影响目的:了解重型肝炎前期动物模型Th17,Treg,Th17/Treg的变化,并了解地塞米松及胸腺肽序列干预对动物模型Th17,Treg,Th17/Treg的变化。方法:小鼠栽眼球取血。大鼠尾静脉取血,肝组织、脾组织匀浆(稀释至相当于106-109个单个核细胞/m L)100u L,置于肝素钠抗凝管中,采用流式细胞术,细胞刺激破膜技术测定细胞因子鉴定免疫细胞。结果:重型肝炎前期动物模型均存在Th17升高,Treg下降,Th17/Treg失衡。大鼠重型肝炎前期动物模型予地塞米松干预后Th17下降,Treg上升,Th17/Treg失衡得到纠正。而胸腺肽干预动物模型Th17有所上升,Treg轻微下降。结论:重型肝炎前期动物模型较正常对照动物均存在Th17/Treg失衡,地塞米松干预后Th17/Treg失衡有所改善,动物组织学也较未予地塞米松干预组有所改善。后期胸腺肽干预后动物模型Th17有所上升,Treg轻微下降。提示重型肝炎前期予地塞米松有利于改善病情,而胸腺肽有可能导致病情进展。第三部分:重型乙型肝炎前期患者血Th17/Treg失衡及糖皮质激素治疗后再平衡目的:重型乙型肝炎是乙型肝炎中最严重的一种类型,其疾病进展迅速,抢救成功率低。本研究旨在了解重型乙型肝炎前期Th17,Treg,Th17/Treg的变化以及糖皮质激素对这些免疫细胞的作用。方法:20例重型乙型肝炎前期患者及11例健康人群入组。入组的重症乙型肝炎前期患者需符合以下特征:患者极度乏力,并有明显厌食、呕吐和腹胀等严重消化道症状;黄疸升高(51umol/L≤TBIL≤171umol/L),且每日上升大于17umol/L;有出血倾向,40%≤PTA≤50%(或1.5≤INR≤1.6);乙型肝炎病毒标记物阳性。健康对照及患者抽取清晨空腹外周静脉血2 ml,置于肝素钠抗凝管中,进行特异性免疫细胞检测(治疗前、治疗中、治疗后),采用流式细胞术,细胞刺激破膜技术测定细胞因子鉴定免疫细胞。结果:重型乙型肝炎前期患者,均存在Th17升高,Treg下降,Th17/Treg明显上升,经积极治疗后20例患者有16例好转,4例未好转。好转组治疗后Th17明显下降,Treg有所上升,Th17/Treg失衡得到纠正。而未好转组治疗后Th17反而上升,Treg轻微上升,Th17/Treg比治疗前反而更高。结论:重型乙型肝炎前期患者均存在Th17/Treg失衡,如果激素治疗后患者出现Th17下降,Treg升高,即Th17/Treg再平衡,那么患者救治成功的机会就很大;如果治疗过程中这种Th17/Treg再平衡没有建立,那么患者就有可能病情进展,最终有可能导致死亡。