【摘 要】
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目的:确证淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠颈动脉球囊损伤所致的血管内膜增生的干预作用,并探讨其作用机制是否与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。方法:1.在体实验用球囊损伤法建立大鼠颈动脉内膜增生模型,60只12周龄雄性SD大鼠随机分为6个组:假手术组（Sham）、球囊损伤组（Model）、ICSII低、中、高给药组（Model+ICS-II-5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg）,阳性药
【基金项目】
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国家自然科学基金（No 81860715）淫羊藿次苷Ⅱ通过RelA-LncRNA H19途径调控VSMC功能抑制血管负性重塑的机制研究；
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目的:确证淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠颈动脉球囊损伤所致的血管内膜增生的干预作用,并探讨其作用机制是否与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。方法:1.在体实验用球囊损伤法建立大鼠颈动脉内膜增生模型,60只12周龄雄性SD大鼠随机分为6个组:假手术组（Sham）、球囊损伤组（Model）、ICSII低、中、高给药组（Model+ICS-II-5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg）,阳性药雷帕霉素组（Model+Rapamycin 0.5 mg/kg）,每组10只,除Sham组外,其余大鼠均建立左颈总动脉球囊损伤模型。术后次日,ICS-II组和Rapamycin组以相应给药剂量灌胃,Sham组和Model组用等体积的双蒸水灌胃,连续灌胃14天,每日1次,14天后取材行H＆E染色,计算管腔面积（lumen area,LA）、血管新生内膜面积（neointimal area,NIA）、中膜面积（media area,MA）及新生内膜面积/中膜面积比（NIA/MA）;免疫组织化学法检测Wnt7b、β-catenin、PCNA、CCND1、OPN在血管新生内膜中的蛋白表达水平。2.离体实验（1）确证ICS-II具有抑制VSMCs的增殖、迁移、表型转换的调控作用并初步分析其作用机制:采用组织块贴壁法体外培养雄性SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,以血小板源性生长因子（PDGF-BB）作为造模工具药,将VSMCs分为5个组:对照组（Control）,模型组PDGF-BB（25 ng/m L）,ICS-II低、中、高给药组:PDGF-BB+ICS-II（ICS-II-10μM、20μM、30μM）。CCK-8和Edu实验检测VSMCs的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期中G0/G1期、S期、G2/M期在总细胞周期中所占百分比;Transwell和细胞划痕实验检测VSMCs的迁移能力;Western Blot检测各组VSMCs中Wnt7b、β-catenin、PCNA、CCND1、MMP2、MMP9、OPN蛋白表达水平。（2）分析ICS-II调控VSMCs的作用是否依赖Wnt/β-catenin:加入GSK-3β抑制剂SB216763（5μM）,将VSMCs分为4个组:对照组（Control）,PDGF-BB（25 ng/m L）组,PDGF-BB+ICS-II-20μM组,PDGF-BB+ICS-II-20μM+SB216763-5μM组。检测指标同（1）部分。结果:1.在体实验:H＆E结果显示Model组大鼠的颈动脉血管内膜增生明显,管腔狭窄,NIA、NIA/MA显著增加（P＜0.05）,经ICS-II中、高剂量和Rapamycin干预后血管内膜增生和管腔狭窄程度明显改善,NIA、NIA/MA明显减小（P＜0.05）;免疫组化结果显示Model组增生的血管内膜中Wnt7b、β-catenin、PCNA、CCND1、OPN的表达水平显著升高（P＜0.05）,经ICS-II中、高剂量和Rapamycin干预后,增生的血管内膜中Wnt7b、β-catenin、PCNA、CCND1、OPN的表达水平显著下降（P＜0.05）。2.离体实验:（1）与PDGF-BB组相比,CCK-8和Ed U结果显示,PDGF-BB+ICS-II中、高剂量组明显抑制VSMCs的细胞活力和增殖能力（P＜0.05）;流式细胞仪结果提示PDGF-BB+ICS-II中、高剂量组能抑制细胞周期的进程,阻滞G1/S期的转导（P＜0.05）;Transwell和细胞划痕实验结果提示,PDGF-BB+ICSII中、高剂量组明显抑制了细胞的迁移能力（P＜0.05）;Western Blot结果显示,PDGF-BB+ICS-II中、高剂量组下调了Wnt7b、β-catenin、PCNA、CCND1、MMP2、MMP9、OPN等蛋白表达水平（P＜0.05）。（2）与PDGF-BB+ICS-II-20μM组相比,CCK-8和Ed U结果显示,SB216763能阻遏ICS-II对VSMCs细胞活力和增殖能力的抑制作用（P＜0.05）;Transwell和细胞划痕实验结果提示,SB216763能阻遏ICS-II对VSMCs迁移的抑制作用（P＜0.05）;Western Blot结果显示SB216763能阻遏ICS-II对VSMCs中β-catenin、PCNA、CCND1、MMP2、MMP9、OPN等蛋白表达水平的下调（P＜0.05）。结论:ICS-II能够抑制球囊损伤所致大鼠颈动脉的内膜增生,抑制VSMCs的增殖、迁移与表型转换,其机制至少与通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,下调Wnt7b与β-catenin的表达有关。
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