增生平抑制胃癌形成的机理研究

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目的:胃癌是我国常见的一种恶性肿瘤,发病率大约占所有消化道恶性肿瘤的一半,死亡率居各种癌症的首位[1]。胃癌给社会和居民造成了巨大的疾病负担,因此及早对胃癌进行预防或者治疗显得尤为重要。胃癌前病变(precancerous lesions of gastriccancer PLGC)主要是指胃粘膜较相应正常组织更容易发生癌变的一种病理变化。PLGC是正常胃粘膜发展成胃癌的必经阶段,且这个过程具有可逆性[2]。在胃癌前病变阶段对患者进行干预治疗,将会有效的降低胃癌的发病率与死亡率。研究表明,中药对胃癌前病变的治疗有着明显的效果。大量的临床试验已经证实,增生平对抑制胃癌的形成有较好的疗效,但是其作用机理并不清楚。基于此目的,本实验主要研究增生平对大鼠胃癌前病变的治疗作用,进一步探讨其抑制胃癌形成的作用机理。方法:1通过连续饮用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)溶液另加定时灌胃的方法诱导Wistar大鼠建立胃粘膜癌前病变模型,同时设立正常对照组,模型组,增生平高剂量组与增生平低剂量组。2分别取各组大鼠胃粘膜组织,采用免疫组化的方法检测各组所有大鼠的胃粘膜组织中PCNA蛋白、cyclinD1蛋白以及CDK4蛋白的表达水平。3采用Western Blot方法检测各组所有大鼠胃粘膜组织中GSK-3β蛋白和β-catenin蛋白表达水平,用RT-PCR法检测各组胃粘膜组织c-myc mRNA表达水平。4用流式细胞技术检测大鼠外周血中CD4+CD8+T细胞比率,采用RT-PCR的方法检测各组所有大鼠外周血中的IL-2、IL-10以及TGF-βmRNA的表达水平,ELISA检测技术检测大鼠外周血中IL-2、IL-10、TGF-β蛋白的水平。结果:1PCNA蛋白在各组的阳性表达率分别是模型组为92.86%,低剂量组为94.12%,高剂量组为57.89%,正常组为0。cyclinD1蛋白在各组的阳性表达率分是模型组为100%,低剂量组为94.12%,高剂量组为52.63%,正常组为5%。CDK4蛋白在各组的阳性表达率分别是模型组为100%,低剂量组为94.12%,高剂量组为68.42%,正常组为5%。与正常组相比,模型组的PCNA、cyclinD1及CDK4蛋白表达阳性率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组与模型组相比,PCNA、cyclinD1及CDK4蛋白阳性表达率明显降低(P<0.05),低剂量组的PCNA、cyclinD1及CDK4蛋白表达阳性率与模型组之间的差异无统计学意义(P>0.05),而高剂量组的阳性率低于低剂量组(P<0.05)。2模型组β-catenin蛋白表达水平(0.333±0.042)与c-myc mRNA表达水平(0.921±0.083)显著高于正常组(P<0.05),高剂量组与低剂量组的β-catenin蛋白表达水平和c-myc mRNA表达水平与模型组相比明显降低(P<0.05),而高剂量组β-catenin蛋白表达水平(0.282±0.010)与c-myc mRNA表达水平(0.506±0.047)明显低于低剂量组(P<0.05)。与正常组(0.898±0.099)相比,模型组GSK-3β蛋白表达水平(0.156±0.013)明显降低(P<0.05),高剂量组与低剂量组GSK-3β蛋白表达水平与模型组相比明显升高(P<0.05),而高剂量组GSK-3β蛋白表达水平(0.603±0.064)明显高于低剂量组(0.377±0.050)。3模型组大鼠外周血中IL-10、TGF-βmRNA表达水平及其蛋白表达水平显著高于正常组,IL-2mRNA及其蛋白表达水平显著低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组与低剂量组的各个大鼠外周血中IL-10、 TGF-βmRNA表达水平及其蛋白表达水平显著低于模型组,IL-2mRNA及其蛋白含量表达水平显著低于模型组(P<0.05)。与低剂量组相比,高剂量组的IL-10、TGF-βmRNA及其蛋白表达水平明显降低,而IL-2mRNA及相应蛋白表达水平则显著升高(P<0.05)。模型组(2.362±0.212)与增生平高剂量组(3.625±0.378)和低剂量组(3.072±0.159)的CD4+CD8+T细胞比率明显低于正常组(4.651±0.757)(P<0.05),且高剂量组的CD4+CD8+T细胞比率与低剂量组相比明显升高(P<0.05)。结论:1增生平能够抑制PCNA、cyclinD1及CDK4蛋白表达水平,从而对胃粘膜的癌前病变有较好的阻断作用。2增生平能够抑制β-catenin蛋白与c-myc mRNA的表达,并能上调GSK-3β蛋白表达水平,从而对Wnt通路起到良性的调节作用。3增生平能够抑制IL-10和TGF-βmRNA及蛋白的表达水平并能促进IL-2mRNA及蛋白的表达,同时能够上调CD4+CD8+T细胞比率,从而在胃粘膜癌前病变形成过程中增强免疫调节作用。
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