MiR-449a/b与Notch1在NSCLC组织中表达及其调控机制研究

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目的:研究Notch1与miR-449a/b在肺癌组织中的表达,并通过对两者相关性的分析,以初步探讨miR-449a/b与Notch1的靶向调控关系。方法:以NSCLC患者术后新鲜癌组织与配对的癌旁组织为研究对象,分别通过western blot、RT-PCR技术检测肺癌组织及癌旁组织中Notch1的表达,并通过qRT-PCR检测肺癌组织中的miR-449a/b表达,分析其与notch1的相关性。同时利用生物学分析和预测miR-449a/b的调控关系,并进行双荧光素酶实验验证。结果:①在90例组织样本中,癌组织中Notch1表达阳性率为73.3%,在癌旁组织中为30%,差异具有统计学意义(P<0.05)。②本实验在对90例标本中Notch1蛋白表达水平与临床病理因素的相关性分析中发现,不同的病理类型中的Notch-1表达存在差异,差异具有统计学意义(P<0.05)。另外,在Notch1与其他临床病理各因素的分析中,发现肺癌TNM分期与Notch-1的表达显著相关(P<0.05),但是在分析其与年龄因素、性别因素、瘤体位置、大小及淋巴结转移情况方面未显示出相关性(P>0.05)。③组织样本的qRT-PCR结果显示,miR-449a高表达的样本有42例,其中癌组织21例,癌旁组织21例,而miR-449b高表达的样本有39例,其中癌组织18例,癌旁组织21例。统计学分析显示miR-449a/b在癌组织及癌旁组织中表达均无统计学差异,提示其高表达与肺癌的相关性。另外,两者表达水平与Notch1蛋白表达水平的结果匹配性均较差。④进一步的双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-449a/b对Notch13’UTR的调控作用不明显,无显著性差异。结论:①Notch1蛋白在肺癌组织中较癌旁组织中高表达,提示在肺癌组织中,Notch1表达水平高于癌旁组织,可能与肿瘤的发生发展密切相关,Notch1mRNA表达水平检测结果同样支持该结论;②在肺鳞癌组织中Notch1蛋白表达阳性率显著高于肺腺癌,差异具有统计学意义,提示Notch1在肺癌患者组织学分型有关,可能与肺癌细胞分化具有密切关系;③Notch1的高表达在I、II期肺癌患者中较III、IV期低表达,提示Notch1可能与癌细胞的侵袭有关;④肺癌组织中miR-449a/b的表达水平未显示出与肺癌的相关性;⑤miR-449a/b表达水平与Notch1表达情况匹配较差,未表现出显著相关性。进一步的双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-449a/b对Notch1的调控作用不明显,证实miR-449a/b与notch1的靶向调控关系不成立。
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