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从华中农业大学水稻田采集的紫云英根瘤中分离到62株华癸中生根瘤菌，经培养观察、显微观察和回接实验确认其中57株为典型的华癸中生根瘤菌。供试菌株的最早现瘤时间为8d，最迟超过30d，多数菌株为10-22d。对其中的44株质粒的检测结果表明：13株含3个质粒、21株含2个质粒、7株含1个质粒、3株不含质粒，大小范围为150-428kb。采用Tn5-mob-sacB转座子对含有的3个大质粒的HN3015菌株进行定向标记，获得各供试质粒的标记菌株。利用sacB基因对蔗糖的敏感性进行标记质粒消除实验，获得HN3015的质粒消除或缺失突变株，其中HN3015-1为第一大质粒pMhHN3015c消除突变株，HN3015-2为为第二大质粒pMhHN3015b消除突变株，HN3015-3为第三大质粒pMhHN3015a消除突变株，HN3015-6为pMhHN3015a部分缺失突变株。对HN3015与突变株的培养特征、生长速度和共生结瘤能力进行的研究结果表明：质粒消除或缺失突变株的培养特征均与出发菌株一致，第一大质粒pMhHN3015c与固氮有关，第二大质粒pMhHN3015b的消除则失去结瘤能力，第三大质粒pMhHN3015a的消除或缺失不但未影响结瘤与固氮能力，其消除反而可增强突变株HN3015-3的竞争结瘤能力和共生效率。抗酸性实验结果表明3个内源质粒均对HN3015的抗酸性有正控制作用，并对其抗碱性起负控制作用。生长实验结果表明：3个内源质粒亦对生长速率有负控制作用。将pMhHN3015c：：Tn5-mob-sacB从供体菌HN3015T18导入受体菌HN308SR后，受体菌的第一大质粒pMhHN308c被消除，表明pMhHN3015c与pMhHN308c不相容，应归于同一不相容群。在对转移接合子HN308SRN18进行质粒消除时，发现其内源小质粒pMhHN308a与pMhHN3015c：：Tn5-mob-sacB同时消除，获得了仅含pMhHN308b的质粒消除突变株HN308SRN18D。盆栽结瘤试验结果表明：转移接合子HN308SRN18只能在紫云英上形成无效根瘤，证明其内源大质粒pMhHN308c与固氮有关，且不能为导入大质粒pMhHN3015c取代。质粒消除突变株HN308SRN18D依然保持结瘤能力的结果表明pMhHN308b与结瘤有关。将HN3015的另一标记小质粒pMhHN3015a：：Tn5-mob-sacB导入HN308SR时，发现受体菌的第二大质粒被消除，显然pMhHN3015a与pMhHN308b不相容，应属于同一不相容群，并与HN308SR的pMhHN308a和pMhHN308c属于不同的不相容群。但转移接合子HN308SRN29的质粒消除实验未获得质粒消除突变株。pMhHN3015a和pMhHN308a的大小相近，仅凭凝胶电泳位置难于区分。盆栽结瘤试验结果表明：pMhHN308a与HN308的结瘤有关，而含有质粒pMhHN3015a、pMhHN308a和pMhHN308c的转移接合子HN308SRN29却失去了结瘤能力。本结果表明：pMhHN308a可能因与pMhHN3015a发生了重组而丢失了结瘤基因，其Tn5亦可能因转座至染色体而不能获得质粒消除突变株。用三亲本杂交法将供体菌HN3015的2个标记质粒pMhHN3015a和pMhHN3015c分别导入受体菌7653R-1SR时，发现这2个质粒均可分别与7653R-1SR中的pMh7653Ra共存，它们应属于不同的不相容群。但转移接合子7653R-1SRN29的质粒消除突变株7653R-1SRN29D-B在消除外源质粒的同时却产生了一个新质粒p76H4。但在另一质粒消除突变株7653R-1SRN29D-A中却未发现这个新质粒。盆栽结瘤试验结果表明：7653R-1SRN18只能形成少数无效根瘤，其瘤数与7653R-1SR相近。前面已证实pMhHN3015c与固氮能力有关，但它的导入却未能恢复受体菌7653R-1SR的固氮能力。7653R-1SRN18的质粒消除突变株依然与7653R-1SR-样，只能形成少量无效根瘤。7653R-1SRN29在紫云英根上亦形成无效根瘤，但瘤数接近7653R。前面已证实pMhHN3015a能抑制HN3015的共生效应，但本研究将它导入7653R-1SR时却反而提高了转移接合子的结瘤能力。7653R-1SRN29的质粒消除突变株7653R-1SRN29D-A也只能形成少量无效根瘤，但另一质粒消除突变株7653R-1SRN29D-B却完全丧失了结瘤能力。将7653R的共生质粒pMh7653Rb导入受体菌HN308SR时，发现受体菌的两个稳定内源质粒pMhHN308b和pMhHN308c随着外源质粒pMh7653Rb的导入而同时被消除。盆栽结瘤试验结果表明：pMhHN308b与结瘤相关，由于pMh7653Rb的导入能维持HN308SRN14的结瘤能力，其瘤数也超过HN308SR，但不能替代pMhHN308b和pMhHN308c。质粒消除突变株HN308SRN14D只形成少量无效根瘤，确认pMhHN308a与HN308的结瘤能力有关。用三亲杂交法将7653R的共生质粒pMh7653Rb导入HN3015SR时发现所获转移接合子HN3015SRN14的第二大质粒为pMhHN7653Rb，受体菌HN3015SR的第二大质粒则由于外源质粒的不相容性而被消除。HN3015SRN14的质粒消除实验获得了消除第二大质粒的HN3015质粒消除突变株(仅含pMhHN3015a和pMhHN3015c)。盆栽结瘤试验结果表明：转移接合子HN3015SRN14只能形成无效根瘤，其标记质粒消除突变株HN3015SRN14D则完全失去结瘤能力。采用通用引物RC1和RC3对6个供试转移接合子及其质粒消除突变株进行repC基因的PCR扩增结果表明：除质粒消除突变株7653R-1SRN18D和7653R-1SRN29D未能扩出repC基因外，其它供试菌株均扩出了750bp左右的repC序列。对所有供试10个菌株的repC序列测定与同源性比较结果表明：供试华癸中生根瘤菌株的repC序列高度相似(99％)，但与其它根瘤菌的repC基因有明显差异。