鸡IFIT5基因的克隆、表达及其抗病毒功能研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dong0003060
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
IFIT家族是一类主要受干扰素、病毒和脂多糖诱导表达的干扰素诱导基因。其编码的蛋白可通过抑制翻译起始,识别、结合并隐退特定类型的病毒核酸或蛋白以及参与调节细胞固有的和非固有的免疫反应等方式来抵抗病毒的入侵。然而,目前该家族基因在禽类上的研究甚少。本研究首先通过分子克隆的方法获取了鸡IFIT5基因CDS区全长序列,并对其相关分子生物信息进行了分析与预测。其次,采用qRT-PCR技术构建了鸡IFIT5基因的组织表达谱,并在机体和细胞水平上检测了鸡IFIT5基因对不同毒力新城疫病毒毒株和不同诱导刺激物的免疫应答差异。最后,在细胞水平上采用siRNA干扰和外源过表达技术初步探究了鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3对IFIT5基因的表达调控作用以及鸡IFIT5基因对IRF-3和NF-κB信号通路的影响。取得的主要结果如下:(1)鸡IFIT5基因CDS区全序列长1440bp,由两个外显子组成,共可编码479个氨基酸。其推导氨基酸序列与鸟类对应序列的相似度均不超过70%,与哺乳动物对应序列的相似度均不超过50%。(2)鸡IFIT5基因在脾、心、肺、胸腺、肾和小肠组织中具有相对较高的mRNA表达丰度,在法氏囊、脑、胸肌和腿肌组织中具有相对较低的mRNA表达丰度,而在肝脏组织中几乎不表达。(3)鸡IFIT5基因在两攻毒组鸡只的胸腺和脾脏组织中的表达量变化均呈先上升后下降的趋势且在第二天达到峰值,在Mukteswar攻毒鸡只的法氏囊组织中呈先上升后下降的趋势且在第一天达到峰值,在F48E9攻毒鸡只的法氏囊组织中则呈持续上升趋势。(4)鸡IFIT5和IFN-β基因在转染poly I:C和poly dA:dT 4 h后表达水平显著上调。(5)鸡IFIT5和IFN-P基因在感染Mukteswar毒株后存在明显协同表达关系,且在8h后的二次感染过程中鸡IFIT5基因的表达量相对于IFN-β基因呈现出明显的延后上调。(6)过表达鸡MDA、MAVS和IRF-3基因可显著增强鸡IFIT5基因的免疫应答水平,而干扰鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因可显著抑制鸡IFIT5基因的免疫应答水平。(7)过表达鸡IFIT5基因可显著增强IRF-3和NF-κB应答基因的免疫应答水平。上述结果表明:鸡IFIT5基因在非刺激状态下的表达分布具有明显的组织特异性,在受到RNA病毒或DNA病毒刺激时表达量会明显上调,且其表达水平会受到鸡MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3蛋白的调控。此外,鸡IFIT5蛋白对IRF-3和NF-κB信号通路具有正向调控作用。
其他文献
本文对猪疾病抗性候选基因克隆、定位、组织表达和关联进行了分析。文章探讨了疾病抗性候选基因与免疫指标的关系,以寻找有用的免疫表型指标或基因用于猪的抗病育种实践。本实
初中体育教学应该把课堂教学与课外实践结合起来,让体育课堂变得丰富多彩,让学生喜欢上体育课.课堂教学与课外实践有效结合,既可以提高体育课堂教学效率,也可以提高学生的学
为了顺应时代的发展以及社会对综合型人才的需求,中学教育提倡培养德智体美劳全面发展的优秀学生,中学体育教学也越来越受到人们的重视.但是,目前中学体育教学存在很多问题,
体育教学在一定程度上对学生个性的培养具有非常重要的影响,在中学体育课堂上实现学生的个性发展,是每一个体育教师应该思考的问题。教师可以从心理学的角度进行教学;关注学
“三农”问题在北京仍然是一个较为突出的问题,也是政府十分关注的问题.通过科技来解决“三农”问题,核心是通过提升区县产业的科技含量、提高农民素质,发展农民经济协作组织
本文基于网络的特征,分析了网络伦理道德失范的主要表现形式,并针对网络伦理道德失范的原因,探讨了预防和抑制网络伦理道德失范的措施。 Based on the characteristics of t
篮球是一项群体运动,也是高中的一门体育必修课.篮球是一项对身体有益的活动,尤其是对正处于青春期的高中生,在打篮球的过程中他们的体力容易消耗,这使他们的体能积蓄可以达
本文在筛选出鼠李糖乳杆菌L3-22(LRL3-22)株的基础上,对其培养条件、活性物质、代谢产物的抑菌活性、细胞破碎方法及小鼠免疫功能进行了研究,为该菌微生态制剂的研制开发奠定基
AIM: To compare outcomes using barbed polyglyconate(V-Loc 180) vs monofilament monocryl suture in forming vesico-urethral anastomosis(VUA) during robot assisted
本试验通过采用恒定磁场对柞蚕卵进行处理试验,在柞蚕卵发育至反转期时,以不同强度及不同时间辐照处理柞蚕卵。研究了其对经济性状的影响,探索了增加产量的机理。试验证明了在胚