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目的:研究拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)胞外多糖EPS诱导白血病细胞凋亡及人慢性粒细胞白血病细胞株K562凋亡的分子机制。方法:1.MTT法评价EPS对小鼠粒-单细胞白血病WEHI-3细胞,人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖抑制作用。2.Hoechst33258荧光染料染色,观察经EPS处理后的WEHI-3细胞和K562细胞核形态变化。3.采用碘化丙啶染色,检测EPS对K562细胞周期阻滞的作用。4.使用caspase活性检测试剂盒检测EPS对K562细胞内caspase-3、caspase-9、caspase-4、caspase-8的活性影响。5.Fluo-3 AM荧光探针检测经EPS处理后的K562细胞内钙离子浓度是否发生变化。6.采用RT-q PCR技术检测经EPS处理后的K562细胞内GRP78和CHOP基因的水平情况。7.采用Western Blotting方法检测经EPS处理后的K562细胞内Bcl-2、Bax、cyt-C、x IAP、FADD、P53、GRP78、CHOP等相关凋亡蛋白的表达情况。结果:1.EPS对体外培养的WEHI-3细胞、K562细胞增殖有抑制作用且具有剂量依赖性。浓度为0.0625、0.125、0.25、0.5、0.75、1mg/m LEPS处理WEHI-3细胞72 h后,抑制率分别为18.7%、19.27%、21.79%、22.03%、26.04%、26.94%;以上相同浓度的EPS处理K562细胞72h后抑制率分别为11.47%、12.51%、15.82%、25.42%、33.82%、39.83%。2.EPS处理WEHI-3和K562细胞48 h后,细胞核形态呈现明显凋亡样改变,出现染色质固缩凝集现象。3.用0.25、0.5、1 mg/m L不同浓度的EPS作用于K562细胞48 h后流式分析结果表明S期的细胞比例随着EPS浓度增大而增多。4.用0.25、0.5、1 mg/m L不同浓度的EPS作于K562细胞48 h后caspase-3、caspase-8、caspase-4、caspase-9活性较对照组明显增强,其中caspase-4、caspase-9升高明显。5.细胞内钙离子检测结果显示EPS处理K562细胞48 h后,胞质内钙离子浓度虽EPS浓度增大而增大。6.RT-q PCR结果显示经EPS处理后的K562细胞,转录水平上CHOP基因m RNA表达升高、GRP78基因m RNA表达下降。7.Western Blotting结果表明EPS处理K562细胞48 h后线粒体通路中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调、促凋亡蛋白Bax的表达上调、线粒体中cyt-C释放到胞质的量增多、x IAP蛋白表达减少;死亡受体途径的FADD蛋白表达量增多、抑癌基因P53蛋白表达量增多;内质网通路中的CHOP蛋白表达升高、GRP78蛋白表达下降。结论:EPS体外可以抑制小鼠粒-单细胞白血病WEHI-3细胞和人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖。实验结果显示EPS可以通过诱导K562细胞凋亡发挥抑制增殖作用,其机制涉及到凋亡的三大经典途径共同作用。