【目的】以中医药理论为指导,采用现代分离分析技术,结合药理药效实验,从有效单体化合物出发,建立其含量测定方法,应用PAST 3.19软件中的主成分分析和SPSS 20.0软件中的判别分析筛选出各产地特色药材,与各药材中有效成分群之间配伍配比进行药效拟合实验,找出最佳的配伍配比,再通过药理药效实验(小肠推进实验、脾虚大鼠模型实验),初步验证最佳配伍配比,最后通过建立神经网络模型,将各产地枳壳样品进行分类,以便对枳壳样品最佳配伍配比的快速筛选,阐述其道地性,并指导最佳采收期。从而为建立枳壳客观评价的质量标准和中医临床用药提供科学依据。【方法】1.采用正常小鼠离体小肠平滑肌实验,对枳壳中主要活性成分(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橘皮内酯、柚皮素、橙皮素、橘皮内酯、马尔敏、川陈皮素、橘皮素和辛弗林)进行初步筛选。并建立筛选出的活性成分对正常小鼠离体十二指肠平滑肌自发性收缩的量效关系,进一步筛选出对其具有量效关系且作用效果明显的有效单体化合物。2.建立枳壳中筛选出来的有效单体化合物,即黄酮苷类(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷)和生物碱类(辛弗林)的HPLC含量测定方法,以含量测定结果为指标,初步确定枳壳采收期,并运用PAST 3.19软件和SPSS 20.0软件对含量结果进行主成分分析和判别分析,筛选出不同产地的特色药材,并对其水煎液进行含量测定。3.采用正常小鼠离体十二指肠平滑肌实验,对筛选出的不同产地药材进行比较,筛选出最佳产地药,结合产地药中有效单体化合物配伍配比药效拟合实验,初步确定最佳配伍配比。4.采用正常小鼠小肠推进实验,对初步确定的最佳配伍配比进行体内验证试验。5.采用脾虚大鼠模型实验,通过最佳配伍配比组合物对其血清胃泌素、血浆乙酰胆碱、胃动素、P物质和血管活性肠肽的影响,再次验证最佳配伍配比。6.通过构建一种基于神经网络的配伍配比模型,将已知含量枳壳样品进行分类,为快速寻找道地药材提供依据,从而阐述道地性的内涵,进一步指导采收期。【结果】1.初步筛选出8个(芸香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、橘皮素和辛弗林)对离体小肠有影响作用的活性成分,其中辛弗林、新橙皮苷和橙皮苷有明显的量效关系。2.建立了枳壳中筛选出来的有效单体化合物,即黄酮苷类(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷)和生物碱类(辛弗林)的HPLC含量测定方法;初步确定枳壳的采收期为大暑前后;结合有效单体化合物的有效浓度范围可知,辛弗林在枳壳中的含量远没有达到其对胃肠道影响的浓度;筛选出不同产地的特色药材,其水煎液含量测定表明,有效单体化合物的煎出率均小于醇提液。3.江西产地在浓度为0.1g/m L,给药体积为10～500μL时,较其他产地的效果明显,而各产地的拟合实验结果和显示,组合物与各种产地的枳壳趋势是一致的,根据实验结果,初步可以认为,江西产地枳壳水煎液中四种黄酮苷类化合物的配比关系是最佳的,根据其含量结果,可以算出其配比为:芸香柚皮苷:柚皮苷:橙皮苷:新橙皮苷=1:14:1:13。4.与空白组相比,枳壳中有效单体化合物最佳配伍配比组合物低、中、高剂量组对正常小鼠小肠推进具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。5.与模型组相比,枳壳中有效单体化合物最佳配伍配比组合物低、中、高剂量组均对脾虚模型大鼠胃肠激素有较显著的影响,可显著升高Ach、GAS、P物质、MTL含量,降低VIP的含量,这与西药多潘立酮的作用效果几乎相同。6.构建的神经网络模型,可将已知含量的枳壳样品分为最佳配伍配比和非最佳配伍配比,可快速对枳壳样品进行筛选。【结论】1.离体小肠实验表明,枳壳中的活性成分为:芸香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、橘皮素和辛弗林。但具有显著量效关系的活性成分为:橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林。为下一步有效单体化合物的含量测定提供理论依据和物质基础。2.建立的枳壳中筛选出来的有效单体化合物,即黄酮苷类(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷)和生物碱类(辛弗林)的HPLC含量测定方法简便、准确、可靠,重现性好,可作为枳壳中黄酮苷类和生物碱类化合物含量测定的有效方法。为进一步考察枳壳中各有效成分的配伍配比和建立枳壳客观评价的质量标准提供了理论依据。经含量测定结果确定了最佳采收期,为今后枳壳的合理采摘提供科学依据。筛选出的产地药材及其水煎液的含量测定,为下一步进行单体拟合实验提供科学依据和理论基础。3.确定了枳壳中有效单体化合物的最佳配伍配比,提示枳壳药效物质基础是有效成分群按一定的配伍配比关系产生的作用,为进一步阐述道地性的内涵和中医临床用药提供科学依据。4.构建的神经网络模型方法简单、可靠、重现性好、操作简单,对于快速筛选枳壳药材中的含量配比是否最佳筛选提供理论参考,同时对阐述枳壳道地性的内涵和指导最佳采收期具有一定的现实意义。