天浆壳生物碱提取及其对Tca8113细胞的生物活性评估

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目的天浆壳(Japamese metaplexis pericarp)是植物萝藦(Metaplexis japonica(Thunb.)Makino)的果壳,其含有多种具有生物功能的化合物。本实验旨在优化天浆壳生物碱的提取工艺,分离生物碱并对其结构进行表征,研究其生物碱粗提物的抗氧化活性,验证天浆壳生物碱对Tca8113细胞的增殖抑制作用。方法以天浆壳为研究对象,在单因素实验的基础上,应用响应面法对天浆壳生物碱的提取工艺进行优化。通过硅胶柱层析进一步分离,得到单一生物碱化合物。采取旋光法(Polarimetry)、核磁共振波谱法(NMR)、质谱法(MS)对生物碱进行结构表征。经由比色实验检测天浆壳生物碱对DPPH·、O-2·和·OH的清除能力,评价其体外抗氧化活性。测定Tca8113细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活力。采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylt etrazolium bromide)检测法、Hoechst 33342染色法研究天浆壳生物碱Tca8113细胞的增殖抑制作用。结果天浆壳生物碱的最佳提取工艺参数为:提取时间40 min,甲醇体积分数88%,提取温度20℃,液(m L)料(g)比30∶1,此条件下生物碱的提取量为230 mg/kg。从天浆壳中分离出secu’amamine D,securinine,securitinine三个生物碱。比色实验表明,天浆壳生物碱对DPPH·、O-2·和·OH的最高清除率分别为87.43%,44.69%和29.25%。SOD实验表明Tca8113细胞内SOD活力提高。MTT法显示三个生物碱对Tca8113细胞均具有明显的抑制作用;Hoechst 33342染色实验结果观察到三个生物碱均能引起Tca8113细胞的细胞核出现皱缩、碎裂等特征。结论天浆壳生物碱具有一定的抗氧化活性,从天浆壳中分离出secu’amamine D,securinine,securitinine三个生物碱,三个生物碱均可抑制Tca8113细胞增殖。
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