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亚洲玉米螟是为害玉米的重要粮食害虫,采用生防细菌控制亚洲玉米螟危害是重要的害虫综合治理方法之一。本研究采用RACE的方法克隆了亚洲玉米螟幼虫免疫相关基因转录因子Relish基因;采用3种生防细菌铜绿假单胞菌、藤黄微球菌和苏云金芽孢杆菌,通过注射或喂饲的方法处理了亚洲玉米螟幼虫,研究了 3种昆虫致病菌对Relish基因和4种抗菌肽Cecropin A、Gloverin、Moricin和Attacin基因表达的影响;采用RNA干扰技术研究了Relish基因的表达调控机理。本研究为探索Relish基因的功能打下了基础,为进一步开发昆虫免疫调剂类农药提供了理论依据。主要研究结果如下:采用3’-RACE和5’-RACE技术,获得了亚洲玉米螟幼虫Relish基因的全长cDNA序列。该基因全长3165 bp,包含一个 2882bp的开放阅读框(ORF),起始密码子为ATG,终止密码子为TAG,编码956个氨基酸,包括一个153 bp的5’非编码区(5’UTR)和一个81 bp的3’非编码区(3’UTR)。生物信息学预测分析表明:Of-Relish基因编码蛋白的计算分子量约为98 kDa,无跨膜结构域,2个糖基化位点,101个磷酸化位点,为亲水性蛋白。三维结构显示,有4个α螺旋,16个β折叠。对亚洲玉米螟4龄幼虫分别注射了铜绿假单胞菌和藤黄微球菌后,利用荧光定量PCR技术,检测了幼虫体内转录因子Of-Relish和4种抗菌肽Cecropin A、Gloverin、Moricin及Attacin基因的表达情况。结果表明:与对照组相比,铜绿假单胞菌或藤黄微球菌侵染后,亚洲玉米螟体内的Of-Relish及4种抗菌肽基因表达水平明显上升(P<0.05)。说明注射铜绿假单胞菌和藤黄微球菌可诱导亚洲玉米螟Of-Relish基因调控4种抗菌肽基因表达,从而产生免疫防御反应。采用RNA干扰技术,给亚洲玉米螟3龄幼虫注射了 dsRNA-Relish后发现在84h、96h、108h、120 h时,Of-Relish基因表达分别下调至对照组的42.08%、42.61%、47.69%、64.85%,证明Of-Relish基因在此期间被成功干扰;干扰Of-Relish基因并同时分别注射铜绿假单胞菌和藤黄微球菌,结果表明:相对于单独注射细菌,Of-Relish和 4 种抗菌肽CecropinA、Gloverin、Moricin及Attacin基因都被明显抑制。说明了Of-Relish可调控4种抗菌肽基因的表达。采用苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Kurtaki,Bt),将Bt与人工饲料混合后饲喂亚洲玉米螟4龄幼虫。实时荧光定量PCR检测表明:Of-Relish及Cecropin A、Gloverin、Moricin及Attacin的表达水平明显上升,说明喂饲Bt也可诱导亚洲玉米螟Of-Relish基因调控4种抗菌肽基因表达,产生免疫防御反应。