研究背景脑血管疾病(Cerebrovascular disease,CVD)是神经系统的常见病和多发病。脑卒中是CVD的主要类型,具有高发病率、高死亡率和高复发率的特点。其中,缺血性脑卒中是最常见的脑卒中类型,占全部脑卒中的60%~80%。是世界上人口残疾和死亡的重要原因,给社会及家庭造成沉重负担。我国传统中药丹参是唇形科植物的干燥根部及根茎,具有活血化瘀等功效。丹参的主要有效成分丹参酮ⅡA磺化后产生的丹参酮ⅡA磺酸钠(Sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS),生物学活性高,水溶性强,临床用途广泛。包括调节微血管痉挛及改善侧支循环,减轻缺血再灌注损伤,保护受损神经细胞等。因此,在心脑血管病治疗中具有广阔应用前景。研究目的本实验研究STS对缺血性脑卒中模型大鼠的神经保护作用,探讨其分子机制或可能的信号通路,为脑梗死急性期的治疗提供更多的实验依据并丰富其干预手段。研究方法1.实验动物分组选取60只质量为275?30g的SD大鼠,随机分成五组,每组12只。包括假手术组;大脑中动脉栓塞模型组;STS低、中、高剂量组。2.动物模型构建模型组和STS各剂量组均采用改良的Longa法建立大脑中动脉闭塞模型,缺血2小时后再灌注。假手术组的SD大鼠不放置线栓,仅做切皮和血管分离手术。3.给药方法五组实验动物均按kg体重给予生理盐水或药物,具体如下:假手术组和模型组术后腹腔注射等量的生理盐水10ml/kg。STS低、中、高剂量组术后分别给予STS原液10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg,均于缺血造模2小时后再灌注时腹腔注射。4.死亡率统计统计术后24小时大鼠的死亡数量,计算方式:该组死亡大鼠数量/该组大鼠总数。5.大鼠神经功能评分术后12、24小时采用Longa评分法进行神经功能评分。0分:神经功能正常;1分:提尾时对侧肢体屈曲;2分:行走时向患侧转圈;3分:行走时向患侧倾斜或摔倒;4分:无自发活动;5分:死亡。6.脑含水量处死大鼠后取出完整大脑,将梗死侧大脑用电子精密天平称重。随后将其置于电热恒温干燥箱烘干至恒重,再次称量并计算大鼠脑含水量。7.脑梗死体积将脑组织切片后用TTC(2,3,5三苯基氯化四氮唑)染色,数码相机拍照,采用图像分析软件计算大鼠脑梗死体积。8.GSH、SOD、MDA和NO含量测定将梗死脑组织匀浆离心取上清液,用BCA法测蛋白浓度。9.SIRT1和FOXO3α含量测定Western blot法检测SIRT1、FOXO3α蛋白表达水平。10.统计学处理采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。组间比较采用独立样本t检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果1.死亡率假手术组大鼠全部存活,模型组死亡率最高,STS中、高剂量组与模型组相比,大鼠死亡率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.神经功能评分各组大鼠评分有显著差异,STS各剂量组的神经功能评分与模型组比较,随药物剂量的递增评分逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3.脑含水量术后各组大鼠均出现脑水肿,模型组含水量最高,STS各剂量组有不同程度的减轻,高剂量组水肿减轻最明显,与模型组比较,有显著差异(P<0.01)。4.脑梗死体积模型组大鼠梗死体积最大,STS各剂量组体积减小,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组梗死体积最小。5.GSH、SOD、MDA、NO模型组GSH和SOD最少,MDA和NO最多。STS各剂量组与模型组相比,随着药物剂量的增加,GSH和SOD含量递增,MDA和NO递减,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组明显增加或减少,有显著差异(P<0.01)。6.SIRT1、FOXO3α模型组的SIRT1和FOXO3α蛋白表达水平最低,STS各剂量组与模型组相比,蛋白表达水平随着药物剂量的递增逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论STS可以降低MCAO术后大鼠死亡率,改善神经功能评分,减轻脑水肿,减小脑梗死体积,高剂量的STS治疗效果最佳。这一保护作用可能是通过SIRT1/FOXO3α信号通路,调节下游氧化应激相关分子的表达实现的。