【摘 要】
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目的建立更简便更安全更可靠的PCR-EIA（polymerasechainreaction-basedenzymeimmunoassay）法定量检测端粒酶活性,以适应临床的需要;探讨PKC抑制剂BisindolylmaleimideⅠ对培养
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目的建立更简便更安全更可靠的PCR-EIA（polymerasechainreaction-basedenzymeimmunoassay）法定量检测端粒酶活性,以适应临床的需要;探讨PKC抑制剂BisindolylmaleimideⅠ对培养人肺腺癌细胞A549的端粒酶活性的影响,为体内端粒酶活性的调节机制的研究提供理论基础.方法将引物TS、CX分别用生物素和地高辛标记,进行端粒重复系列扩增,PCR产物与包被有链亲和素的酶标板结合,并与辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体反应,用四甲基联苯胺（tetramethylbenzidineTMB）显色,建立PCR-EIA法.用不同浓度BisindolylmaleimideⅠ处理培养人肺腺癌细胞A549不同时间后,用台盼蓝染色法检测细胞生存能力,用TRAP-银染色法和PCR-EIA法检测端粒酶活性.结果PCR-EIA法与TRAP-银染色法有很好的相关性,具有较好的灵敏度和重复性,批内变异系数CV为6.24﹪.PKC抑制剂BisindolylmaleimideⅠ能特异地抑制培养人肺腺癌细胞A549端粒酶活性,且具有时间和剂量依赖性.结论PCR-EIA法具有较好的灵敏度与重复性,无同位素污染,较银染法更为简便、快速,检测成本低,无需特殊仪器,适合于各级医院推广.BisindolylmaleimideⅠ抑制培养人肺腺癌细胞A549端粒酶活性可能是通过PKC而起作用,PKC可能参与体内端粒酶活性的调节.
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