维生素B12是人体组织代谢过程中必须的维生素,由于它可以预防和治疗由于内因子(IF)缺乏而引起的恶性贫血,所以又被称为“血液之母”,是保持人体健康的一种重要维生素。由于维生素B12的化学合成需要超过70步反应,使得VB12的工业化生产变得复杂而且昂贵。随着基因工程技术和代谢调控工程技术的快速发展,在微生物发酵生产VB12的过程中,对其生物合成VB12的途径进行改造,其产量得到了很大的提高。为了进一步提高微生物发酵过程中VB12的产量,本课题利用PCR技术扩增费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)中VB12生物合成所有相关的基因,构建单顺反子或多顺反子表达载体,电击转化到费氏丙酸杆菌中,通过测定重组工程菌发酵液中VB12的含量确定基因功能。最终我们扩增出cbiA、cbiB、cbiC、cbiD、cbiM、cbiN和cbiQ等基因片段,最终构建了含cbiB的高效表达载体,为获得高产维生素B12的基因工程菌奠定了基础。