柞蚕作为无脊椎动物,不具备获得性免疫,主要依赖发达的天然免疫系统抵御病原微生物的入侵。昆虫的天然免疫系统主要包括物理防御、体液免疫和细胞免疫三个部分。天然免疫始于对病原微生物的识别,这一过程是通过昆虫体内的模式识别受体识别并结合病原微生物表面特有的模式分子实现的。模式识别受体与病原体相关性分子模式的相互作用会诱导一系列免疫应答反应,包括吞噬作用、黑化作用及产生抗菌肽、抗病毒因子等,从而激活宿主的防御系统。由于其结合碳水化合物的能力,凝集素在许多生物过程中都起着重要作用,包括蛋白质合成和运输,细胞信号传导,病原微生物识别等。凝集素作为一种模式识别受体,序列中含有特异性碳水化合物识别结构域CRD,不同的CRD具有特有的结构并能够识别病原微生物表面特定的模式分子,从而激活昆虫免疫防御系统。其中C型凝集素是天然免疫模式识别受体的一个主要家族,也是最大的动物凝集素家族之一,其对病原体表面上的糖蛋白和糖脂都有很好的结合能力。本研究以5种微生物对柞蚕蛹进行诱导处理,检测了柞蚕凝集素基因的诱导表达情况,探索凝集素基因在不同诱导条件下在不同组织中的表达差异,为深入研究凝集素在柞蚕免疫系统中的作用机制及激活途径提供参考。实时定量PCR结果表明,在不同病原微生物处理下,柞蚕不同组织中各类凝集素的表达水平有明显差异。生物信息学结果显示,ApCTL基因全长912bp,编码304个氨基酸,1-16位氨基酸为信号肽,序列含有两个保守的碳水化合物识别结构域,每个结构域分别含有特异性结合的三肽基序,属于C型凝集素超家族的一员。将凝集素基因ApCTL克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,然后用重组质粒pApM748BE-CTL与重组病毒ApNPV-Δph/egfp⁺基因组DNA共转染培养Tn-Hi5细胞,用末端稀释法筛选重组病毒,感染柞蚕蛹。采用SDS-PAGE和Western blot方法检测目的基因在柞蚕蛹中的表达。凝集活性分析结果显示:ApCTL是一种Ca²⁺依赖型的凝集素,对细菌和兔血红细胞都有很好的凝集活性。