[研究背景] 人促血液血管细胞生长因子(Hemangiopoietin，HAPO)是我室研究发现的一个新的细胞生长因子，具有促进造血干细胞，内皮祖细胞增殖、黏附、趋化的功能。HAPO蛋白最初是从再生障碍性贫血病人尿液中提取的天然蛋白，我室对其功能进行了深入的研究后成功地构建了原核表达体系，并测定了重组蛋白的细胞因子活性。 N端测序显示HAPO蛋白是糖蛋白4(proteoglycan 4，PRG4)的一个不同剪接体形式。HAPO蛋白N端为由PRG4第2、3外显子编码的两个促细胞生成素B结构域(Somatomedin B，SMB)，中间为第4外显子编码的假定的肝素结合区(putative Heparin Binding Domain，pHBD)，C端为第6外显子编码的黏液素样重复序列。PRG4尚有若干剪接体形式，其中有两种为第4、5外显子同时缺失和3、4、5三个外显子同时缺失。这为表达缺失突变蛋白以研究rhHAPO各个结构域的功能提供了条件。 目前国内外对HAPO蛋白的各项研究课题主要集中在本实验室以及与香港和法国等实验室的合作上，工作的重点在于临床实验探讨HAPO与疾病的相关性，体内外实验探讨HAPO生理功能等。已制备得到单克隆抗体，钓得受体，发现下游信号传导途径之一为磷酸酯酶3激酶ATP途径等等，但是对于其结构的研究是一个空白。仅仅局限于NCBI网站BLAST数据库搜索程序给出的关于HAPO蛋白含有4个结构域的信息。因此，rhHAPO结构和功能相结合的研究将能够更好的理解与HAPO蛋白相关的各种实验现象、实验结果。 [实验内容] 本研究在分子克隆构建原核表达体系基础上，利用HPLC，MALDI-TOF-MS，CD，DLS等实验技术研究了以下四个版块的内容，彼此之间有交叉和衔接：单体分子四个结构域的结构特点对功能发挥的影响；不同聚集体分子功能的比较；不同剪接体蛋白对聚集行为的影响；验证假定的肝素结合区(pHBD)是否结合肝素。 [实验目的] 阐明rhHAPO活性功能区所在；阐明形成聚集的区域所在；找到活性最高稳定性最佳的剪接体和聚集体形式；提供初步的理化特性，为rhHAPO新药的研发提供实验室数据。