不同年龄阶段大鼠连合下器Sox2阳性细胞的形态学观察

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目的:观察出生后不同年龄阶段大鼠连合下器Sox2阳性细胞的分布和形态结构的变化。探讨在连合下器中神经干细胞的增殖与分化,从而研究在连合下器中神经干细胞的功能和意义。方法:雄性健康SD大鼠,选取4周龄、8周龄、16周龄、24周龄各6只,共24只。麻醉后,经心脏灌注4%多聚甲醛磷酸缓冲液(0.1mol/ L, pH7.2).常规脱水、浸蜡、包埋,切片后,用免疫组化法检测连合下器处Sox2的表达。1标本制备:将不同年龄阶段组别SD大鼠以水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,自升主动脉灌注4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液(0.1mol/L, pH7.2)行前固定,立即取脑,后固定,经脱水,透明,包埋,选取含连合下器部分,石蜡切片机冠状面切片,厚度约为5μm,制成石蜡切片。本次实验对实验动物的处置符合动物伦理学要求。2免疫组织化学染色:将上述标本取材中得到的石蜡切片经Sox2免疫组织化学染色,苏木精复染后,中性树胶封片,待干燥后使用Olympus BX-UCB光学显微镜观察并照相。3统计学处理:实验结果中所示阳性细胞采用专业图像分析软件Image-Pro Plus 6.0测定阳性细胞数,计算阳性率。经SPSS16.0统计学分析,以P<0.05为具有显著性差异。结果:Sox2免疫组织化学染色后,切片在光学显微镜下观察可以看到Sox2阳性细胞为胞核着色,连合下器与周围边界清晰,腹侧为室管膜面,室管膜面上可见清晰的界线。室管膜面清晰界线的背侧为无结构均质状结构,无阳性表达,均质状结构的背侧可以看到细胞层,细胞呈圆形或椭圆形,不同年龄阶段连合下器区域阳性细胞形态、分布各异,排列致密。在连合下器背侧边缘处可见丰富血管分布,两侧部多于中央部,血管内皮细胞清晰明显。在显微镜下通过测量得到:室管膜细胞大小约为3.5~6.5μm×7.5~10.5μm。将显微镜下观察得到的图像保存,选取相同位置的横断面,同一倍数,相同面积,采用专业图像分析软件Image-Pro Plus 6.0测定阳性细胞数,计算阳性率。4组大鼠阳性率%(x±S, n=6)分别为12.17±2.93,54.17±4.49,76.33±4.23,96.33±1.86。经SPSS16.0分析显示4组组间P<0.05,均有显著性差异。结论:1观察发现随年龄的增加,连合下器的细胞层数逐渐减少,均质层逐渐增厚。2观察发现随年龄的增加,Sox2阳性细胞依次增多,低周龄阳性细胞分布以中央部为主,高周龄逐渐向两侧扩大。
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