真菌疏水蛋白HGFI、HFBI性质与应用的研究

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本文对真菌疏水蛋白HGFI、HFBI性质与应用进行了研究。文章首先选用狄树花的平皿菌丝建立了灰树花的cDNA文库,根据真菌疏水蛋白的分子量范围,从cDNA文库中随机筛选了50个插入片段大小在500—1000bp的转化子进行核苷酸序列测定,发现了两个相似的转化子编码同一段基因序列,其编码的蛋白符合真菌疏水蛋白的一级结构通式。采用真菌疏水蛋白的分离方法,分离到狄树花真菌疏水蛋白,经过RP-HPLC纯化,得到的蛋白在电泳中显示为8kDa条带。经过N端氨基酸序列测定,证明分离到的灰树花疏水蛋白与hgfl编码的蛋白HGFI的N端氨基酸序列是一致的。在瑞氏木霉疏水蛋白HFBI小试培养的基础上,将发酵规模扩大为500L,每升发酵液中疏水蛋白HFBI的产量可以达到1.130g。在疏水蛋白分离纯化方面,建立了HFBI的分离纯化的新工艺,通过SDS、KCl以及Bero1532的双水相抽提,可以特异性的分离HFBI,再通过凝胶过滤层析和离子交换层析,可以得到较高纯度的HFBI,总回收率为62.42%。
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