大量研究表明动脉粥样硬化性疾病与居民的膳食结构相关,但由于不同人的基因异质性以及生活环境差异,膳食结构对于不同人的疾病风险的影响也是不同的。脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是目前用于动脉粥样硬化检测的最佳独立预测指标,能够直接反映动脉粥样硬化导致的血管内皮损伤,并预测心脑血管疾病风险。因此可通过检测不同膳食结构的人群中Lp-PLA2的水平来准确评估动脉粥样硬化疾病的发生风险,并针对不同的人群给出不同的饮食指导方案,降低心脑血管疾病发生率。因此,Lp-PLA2的准确检测对预防动脉粥样硬化疾病具有重要的实际应用价值。本实验基于上述背景,利用原核及真核表达体系筛选了 Lp-PLA2重组蛋白的表达条件,成功制备了真核表达的Lp-PLA2抗原。使用双抗体夹心原理和量子点免疫层析技术开发了一种新型定量检测Lp-PLA2的体外快速诊断试剂盒,并对试剂盒的基本性能进行了评估。试剂盒使用了最新的水溶性量子点作为荧光示踪物质,易于操作且检测精准。最后使用该试剂盒测试了南京地区部分人群的Lp-PLA2水平并调研了他们的饮食习惯,通过统计学方法分析了 Lp-PLA2与饮食习惯之间的关系。本文主要研究成果如下:(1)选用UCOE作为载体构建克隆,在CHO-K1细胞中获得了表达量在20μg/mL、纯度达到90%以上且与抗体反应性好的Lp-PLA2抗原。试剂盒开发过程中使用表达的抗原实现了包被膜C线的制备以及试剂盒配套校准品的制备。(2)通过试剂盒包被膜、标记物垫以及样品垫的制备工艺优化提高试剂盒检测信号值、降低背景干扰。试剂盒包被膜优化后,确定T线PLA5抗体浓度为1.0 mg/mL、C线Lp-PLA2抗原浓度为0.75 mg/mL。标记物垫制备过程选用化学偶联的方式进行量子点标记,以添加2%蔗糖与0.2%BSA的缓冲液作为量子点标记物稀释液,选择1:15的稀释比作为量子点标记物的稀释比例。样品垫封闭液中海藻糖和Casein的添加量分别为5%和1%。(3)试剂盒的检测限为15.44 ng/mL,能够满足测试需求。试剂盒线性范围广,可准确检测浓度在15.70～2000 ng/mL的样本,优于对比试剂盒。重复性检测CV值均小于5%,精密性好。试剂盒在检测时不受脂蛋白等干扰物质的影响,特异性良好,优于对比试剂盒。最后进行了试剂盒的37℃加速稳定性考察,以4℃作为对照组在30天内连续监测,试剂稳定性变幅不超过10%,可长期保存使用。(4)对南京地区随机200人进行了饮食习惯调研,并使用对比试剂盒与自制试剂盒同时对调研人群体内Lp-PLA2水平进行了测试,两试剂盒检测结果相关,一致性好,自制试剂盒检测结果准确可信且操作简便、检测快速。通过调研人群饮食习惯与检测结果的统计学分析,Lp-PLA2的水平能够有效的反映出不同膳食结构群体的血管状态,并有针对性的对膳食结构改善给出不同的建议。本实验成功表达了 Lp-PLA2抗原并完成了 Lp-PLA2检测试剂盒的开发。在对南京地区部分人群进行Lp-PLA2的测试及饮食习惯分析后,简单建立了 Lp-PLA2浓度与膳食结构之间的关系。通过这一标志物的检测,可以针对不同群体给出个性化的膳食结构指导方案以预警动脉粥样硬化疾病的发生。