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小鼠FK506结合蛋白52(Fkbp52)参与表观遗传修饰而且是一种重要的分子伴侣蛋白。据报道,小鼠Fkbp52蛋白可以磷酸化Dnmt1,从而使Dnmt1的甲基化酶活性增加。对于Fkbp52在低氧的条件下是否影响表观遗传修饰尚不清。据报道,DNA甲基化在胚胎发育、维持细胞正常生长、肿瘤发生、发展中起到重要作用,而低氧环境可以改变细胞整体的DNA甲基化(5mC)修饰,可以使细胞整体的甲基化水平降低15%-20%。近来的一些报道发现高等真核生物DNA存在6mA甲基化修饰,并调控基因表达。那么低氧刺激能否改变DNA的6mA修饰尚未报道。本课题的重点是探索低氧对DNA的6mA修饰的影响以及Fkbp52在其中的作用机制。我们的研究结果首先表明,经过低氧处理后,小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)DNA的6mA修饰水平明显下降,而同样处理下Fkbp52敲除的MEF的DNA 6mA修饰明显上升。使用CRISPR-Cas9方法在HEK293T细胞系中敲除同源FKBP4,经低氧处理,也得到了与敲除Fkbp52类似的实验结果。由于果蝇中已鉴定了 DNA6mA去甲基化酶DMAD,我们猜想小鼠中DNA6mA的变化是否与果蝇中同源的Tet蛋白有关。我们进一步发现,Fkbp52蛋白分别与Tet1和Tet2相互作用,而且在低氧的条件下其相互作用明显减弱。为进一步检测DNA6mA变化是否由Tet1和Tet2引起的,我们将野生型MEF和Fkbp52敲除的MEF经过低氧处理之后,检测Tet1和Tet2的表达水平。结果显示,低氧导致野生型MEF中Tet1和Tet2的mRNA水平明显上升,而Fkbp52敲除的小鼠胚胎成纤维细胞中Tet1和Tet2的mRNA水平明显下降,而且在Fkbp52敲除的HEK293T细胞中,也具有相同的表型。因此我们的结论是在小鼠中Tet1和Tet2可能是6mA去甲基化酶。综上所述,我们实验结果表明Tet1和Tet2对于Fkbp52在低氧条件下所控制的DNA6mA甲基化修饰是有一定影响的。已经有研究表明,Fkbp52正向调节多种甾体激素受体转录活性,主要是依赖Fkbp52肽基脯氨酰顺-反异构酶(PPIase)活性,而且此活性受低氧的影响,脂肪分化是否与DNA 6mA修饰有关,具体机制还需要进一步的研究。本课题的研究是对高等真核生物DNA 6mA修饰的调控机制的补充及探索DNA6mA修饰对脂肪分化的影响。希望我们的发现对DNA6mA修饰的研究及对脂肪形成影响的研究有所帮助。