人管家基因RNA降解规律与血痕陈旧度推断的相关性研究

来源 :泰山医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hailianghoyt
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  以人离体血痕为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术研究不同管家基因RNA随时间降解规律,建立GAPDH mRNA和18s rRNA相对含量变化与血痕陈旧度的回归方程,并试图建立标准化的RNA提取与定量检测方法,希望能最终用于法医学实践中。  方法:  1、RNA提取方法的研究:选取6个血痕样本,分别用TRIzol法和硅胶柱纯化法提取RNA,通过紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳对提取的RNA定量和检测其完整性。并用TRIzol法同时提取DNA,对DNA进行STR分型检测。  2、GAPDH mRNA降解规律与引物位置、温度的相关性研究:在温度25℃、湿度50%环境条件下对GAPDH mRNA的4个不同位点进行不同时间点(0d、3d、6d、9d、12d)的实时荧光定量RT—PCR检测,这些位点依次分布于GAPDH mRNA的5′端~3′端,验证mRNA降解可能从5′端向3′端进行的假说;在温度20℃、湿度50%环境条件下对GAPDH mRNA的2个不同位点进行不同时间点(0d、3d、6d、9d、12d)的实时荧光定量RT—PCR检测,分析温度对GAPDH mRNA降解的影响。  3、不同管家基因RNA相对定量策略进行血痕陈旧度推断的进一步研究:模拟法医学真实物证现场,在室内温度是(26±2)℃、湿度大约40%即不受控条件下应用实时荧光定量PCR技术检测GAPDH mRNA和18s rRNA相对含量随时间(0d、5d、10d、15d、20d、25d、30d)的变化规律,尽可能消除实验误差,探讨其与血痕陈旧度的关系。  结果:  1、采用TRIzol法和硅胶柱纯化法提取RNA提取的总RNA纯度和得率均可满足实验要求,结果无显著性差异(p>0.05)。对TRIzol法同时提取的DNA进行STR分型检测,可以得到理想的STR分型图谱。  2、在温度25℃、湿度50%环境条件下,经线性回归分析,血痕中各位点GAPDH mRNA均随时间的延长发生降解,但不同位点的mRNA降解速率不同,靠近5′端的两个位点降解速率快于靠近3′端的两个位点。在温度20℃、湿度50%环境条件下,血痕中所选两个位点GAPDH mRNA均随时间的延长发生降解,但与其在25℃环境条件下相比降解速度变慢。  3、在温度(26±2)℃、湿度大约40%室内环境条件下,用实时荧光定量PCR技术检测(0d、5d、10d、15d、20d、25d、30d)血痕样本中GAPDH mRNA和18s rRNA含量的变化,建立它们与血痕陈旧度的回归方程如下:GAPDH mRNA/18s rRNA:Y=-0.0002X2+0.0198X+1.6776,R2=0.9878。  结论:  1、在研究人血痕管家基因降解规律的实验中,总RNA的提取是实验成功与否的关键,采用TRIzol法和硅胶柱纯化法提取RNA提取的总RNA均可满足实验要求,但TRIzol法可以实现RNA和DNA的同步提取,基于法医学实际检案中节约检材的需要应当选用TRIzol法进行后续实验。  2、血痕中同一管家基因的不同位点存在降解速率的差异性,造成这种差异性的原因可能是mRNA降解是从5′端向3′端进行的。不同的环境温度对mRNA降解的影响较大,因血痕中管家基因RNA降解速度缓慢,所以设计引物时应选取靠近5′端的位点,这些位点降解速率相对稍快,可能更适于血痕陈旧度的推断。  3、依据不同管家基因RNA相对定量策略进行血痕陈旧度推断并进行多因素分析为此研究领域提供了一个新的思路。
其他文献
随着油菜生产的发展,产量要求愈来愈高,油菜倒伏问题也日益突出,现己成为发展高产油菜栽培中一个严重障碍因子。为了解决这一问题,我们对倒伏油菜的各种表现进行了分析,并于
近些年,我国钻井工程在迅速崛起,增强了自身的竞争力,导致井漏问题不断涌现,大量钻井液逐渐流失,对整个钻井工程的发展造成了严重的影响.为了更好的推动整个石油钻井作业可以
在实际开展化工管道的中层焊接以及盖面施工环节,需要考虑到焊接的整体质量以及工艺的整体应用效果.如何在管道的焊接过程中保证焊接质量成为了当前化工企业所需要思考的问题
燃气管道工程的发展应用使得城居生活在享受便利的同时,也面临着隐患问题.此外,管理质量普遍存在不达标、水平低下的情况,迫使建设施工单位应严格加强工程质量管理.本文主要
根据我矿综放工作面切割巷利用锚索预应力加强支护的实际介绍了预应力锚索支护的选型与参数的选择.
化工行业在生产的过程中,需要应用到大量的设备和管道,这些管道的安装如果存在不合理的情况或者存在质量问题,会给企业带来巨大的隐患,甚至引发一些安全事故.所以,化工工艺管
在采矿工程的施工过程中,采矿安全问题一直都是工程当中最为重要的.在实际的采矿施工过程中往往隐藏着许多复杂、不安全的技术因素,而这些因素包括了自然的和人为的,针对这些
随着网络技术的飞速发展,物联网不断深入到我们工作和生活的每个细节。而智能建筑是物联网最早渗入的领域,虽润物细无声,却潜移默化地推动着智能建筑新管理理念的发展。本文
本文以某矿井工作面作为研究对象,结合该工作面生产现状分析其掘进速度的影响因素,基于矿井已有的地质条件及支护参数对其现有的工艺参数进行优化,包含对原有设备的创新、机
高压煤浆泵隔膜破裂问题影响连续生产,结合对设备多次破损情况和运行状况进行分析,阐述可能造成的主要原因,希望对隔膜破裂的真正原因提供帮助.