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在哺乳动物的胚胎着床过程中，胚泡侵入性和子宫内膜接受态的建立是保证成功着床的关键。在这一“着床窗口期”，雌、孕激素通过细胞内受体作用于子宫内膜使内膜问质水肿、血管充血，为胚胎着床提供物质基础；同时子宫内膜细胞分泌大量细胞因子、黏附分子、蛋白水解酶等。各种着床相关因子的表达随妊娠进程发生变化，促进胚胎与子宫内膜相互识别、黏附。
细胞膜表面结合的糖蛋白、糖脂等糖缀合物中的聚糖可参与特异的生物信息传递。Lewis聚糖(Le)在哺乳动物着床期的子宫内膜上皮细胞和胚泡中持续高表达；“着床窗口期”有特异Le糖蛋白出现；Le作为中介分子参与母一胎识别、黏附，并在激素调节下作为信息分子参与着床调控；着床前高分泌Le的胚泡发育速度快、着床能力高。因此，胚胎和子宫内膜细胞表面的Le聚糖表达，可能作为胚胎发育成熟和着床的功能性指标。调控Le聚糖合成的关键酶(α1，2-岩藻糖基转移酶，FUT1)基因表达可以调控聚糖的合成，而由此对胚胎着床过程进行调控，这为干预胚胎着床提供新的方法和思路。
白血病抑制因子(LIF)是介导胚泡着床最主要的细胞因子，LIF作为胚胎营养因子可促进胚胎发育及提高移植成功率，且LIF在人、鼠等哺乳动物的子宫内膜上规律表达也成为胚泡成功植入的保证。细胞表面的β1，4-半乳糖基转移酶Ⅰ(β1，4-GalTⅠ)作为一种细胞黏附分子，参与细胞的黏附、铺展，精卵识别，神经轴突生长，组织形成和肿瘤转移，而胚胎着床与肿瘤转移、侵袭过程非常相似。本文主要观察Le、LIF和β1，4-半乳糖基转移酶Ⅰ对胚胎发育和着床的调节，研究LIF、β1，4-半乳糖基转移酶I对子宫内膜细胞Le表达的相关性，探讨着床因子相互关系以深化胚胎着床调控机理。
论文主要方法和结果如下：
(一)制备妊娠第三天(D3)的子宫内膜上皮细胞并进行分组，以FUTlsiRNA抑制Le合成的关键酶基因FUT1以及通过细胞中加入LIF(10ng/ml)，研究其对胚胎着床的影响。结果显示：与正常组及对照组相比，细胞转染FUTlsiRNA后，RT-PCR检测其FUT1基因表达降低，Dot-blot分析其Le合成相应下降；而LIF对子宫内膜上皮细胞FUT1基因表达有明显促进作用，且Le的合成增高；体外胚胎着床模型观察到：抑制FUT1基因表达后，胚胎的黏附率和扩展生长率(32.7﹪)低于正常培养组(40.7﹪)和干扰对照组(40.0﹪)，而LIF促进FUT1基因表达进一步提高了胚胎的黏附率和扩展生长率(52.0﹪)(对照组为37.3﹪)。表明细胞表面Le聚糖表达水平影响胚胎与子宫上皮细胞间的识别、黏附，并可通过调节Le聚糖合成关键酶基因来影响Le的合成，进一步调控胚胎着床。此外，LIF可能通过上调细胞表面Le表达来调节母一胎之间的识别和黏附。
(二)收集人工助孕体外胚胎培养过程中的胚胎培养液，Dot-blot检测单胚胎培养液中Le的分泌水平，并分析胚胎发育速度、胚胎质量、移植胚胎选择与胚胎Le分泌水平的相关性。结果表明：人胚胎从4-细胞期起即有Le的分泌，随着胚胎的发育Le表达逐渐增高；选择不同患者发育时期相同的胚胎培养液检测提示：发育时期相同的胚胎LeY分泌水平不同；同一患者的发育时期相同的不同胚胎培养液检测提示：Le分泌水平也不同。Le高分泌的胚胎，在受精后D3发育到6．细胞以上的胚胎数(37/45)明显高于Le低分泌的胚胎数(18/30)；用于移植的胚胎数(71.1﹪)也高于低分泌的胚胎数(40.0﹪)。表明Le能促进胚胎发育、提高胚胎质量，有望成为选择优秀胚胎的诊断指标。
(三)将已构建好的β1，4-GalT I基因干扰质粒和过表达质粒分别转染人子宫内膜细胞(RL95-2)，分析转染后对Le表达的影响及其在胚胎着床中的作用。质粒转入RL95-2细胞60h后，荧光显微镜检测和细胞化学染色显示：与正常培养组、空载体组和干扰对照组相比，干扰组细胞内绿色荧光蛋白表达弱，合成Gal β1-4GlcNAc明显降低；过表达组绿色荧光蛋白表达强，合成Gal β1-4GlcNAc明显增高，说明质粒转染效果良好。抑制β1，4-GalT I的基因表达，Le合成的关键酶基因FUT7表达下降，Le合成降低，胚胎的黏附率和扩展生长率(26.7﹪)低于正常培养组(56.0﹪)、空载体组(56.0﹪)和干扰对照组(53.3﹪)；过表达β1，4-Gal TI，FUT1基因表达和Le合成均增高，胚胎的黏附率和扩展生长率(66.7﹪)也明显增高。结果提示β1，4-GalT I参与胚胎着床，并可能通过影响细胞表面的Le聚糖表达来调节母一胎之间的识别和黏附。β1,4-GalT I对胚胎着床的调控机理有待于进一步深入探讨。