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实验目的从细胞和分子水平,观察黄芪对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其分子机制,为中药防止烟碱诱导血管内皮细胞损伤及动脉粥样硬化提供理论依据。实验方法1人脐静脉内皮细胞的传代培养2 MTT法检测烟碱、黄芪对HUVEC细胞生长的影响3分别用硝酸还原酶法检测总NO水平、化学比色法检测HUVEC细胞总NOS水平、酶联免疫法检测ET-1的水平4 RT-PCR PCR法检测胆碱型烟碱受体α7的表达水平结果1烟碱对HUVEC细胞生长的影响及黄芪的干预作用MTT法检测细胞增殖率的结果显示,和空白组比较,浓度为10-3mol/l,10-4mol/l10-5mol/l的烟碱处理组的细胞增殖率均有不同程度的降低,其中浓度为10-4mol/l时,细胞的增殖率显著降低（P＜0.01）。与单用烟碱处理组比较,10-4mol/l烟碱加10-8mol/ld-筒箭毒碱联合处理后,细胞的增殖率显著上升（P＜0.01）,接近空白对照组水平。MTT结果还显示,与单用烟碱处理组和空白组分别比较,单用黄芪组（200ug/ml）细胞的增殖率都有显著提高（两比较的P＜0.01）。与烟碱组比较,黄芪加烟碱组的细胞增殖率显著上升（P＜0.05）。2烟碱对HUVEC细胞功能的影响及黄芪的干预作用。结果显示,烟碱作用后的HUVEC细胞,其总NO水平和总NOS水平均降低非常显著（P＜0.01）,而ET-1水平则显著上升（P＜0.01）;而黄芪作用后细胞的总NO水平和总NOS水平均显著上升（P＜0.01）,ET-1则水平显著降低（P＜0.01）;与烟碱组比较,烟碱加黄芪组的总NO水平和总NOS水平均有显著上升（P＜0.05）,ET-1显著下降（P＜0.05）。3烟碱对乙酰胆碱烟碱型受体α7的影响PCR检测结果显示,和空白组比较,烟碱组的乙酰胆碱烟碱型受体α7 mRNA表达上调（P＞0.005）,凝胶成像分析电泳条带亮度较其他组强。结论本研究提示,在一定浓度范围内的烟碱对HUVEC细胞可以造成损伤,影响细胞的生长,并且使细胞总NO和总NOS水平显著降低（P＜0.01）,ET-1水平显著升高（P＜0.01）,中药黄芪终浓度为200ug/l能明显促进HUVEC细胞增殖,使细胞总NO和总NOS水平显著升高,ET-1水平显著下降,在一定程度上修复烟碱对HUVEC细胞的造成的损伤作用。实验结果同时还显示烟碱作用后的HUVEC细胞中乙酰胆碱烟碱型受体α7表达上调,d-筒箭毒碱能阻断烟碱对HUVEC细胞的损伤作用,并且此阻断作用和乙酰胆碱烟碱型受体α7相关。