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本研究选用脱盐乳清粉为原料分离和提纯出β-乳球蛋白,以β-乳球蛋白水解度为参照指标对β-乳球蛋白在胰蛋白酶作用下的酶解条件进行优化,以鼠肝脏中HMG-CoA还原酶活性变化的体外检测作为主要方法,对产生β-乳球蛋白源降胆固醇生物活性肽的酶解方式及酶解条件进行筛选,并对有较高HMG-CoA还原酶抑制活性的β-乳球蛋白源生物活性肽进行了分离及分子量范围的定性。选用CaCo-2细胞培养法对分离所得的β-乳球蛋白源活性肽抑制胆固醇吸收的生物学功能进行评价。1.结合硫酸铵分段盐析和凝胶层析两种方法,从牛乳乳清蛋白中分离、提纯出β-乳球蛋白。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示:①在20%~30%、70%~80%盐析段只有两条带,分别是β-乳球蛋白和α-乳清白蛋白带;②再用SephadexG-50凝胶过滤层析,电泳结果显示只有一条带,与标准β-乳球蛋白带一致。2.为制备大量的β-乳球蛋白,用胃蛋白酶水解乳清蛋白1.5h,再结合硫酸铵沉淀法,经透析或超滤后,SDS-PAGE检测获得较纯的β-乳球蛋白。3.为了获得产生具有较高HMG-CoA还原酶抑制活性β-乳球蛋白源生物活性肽的酶解方式及酶解条件,首先从5种蛋白酶中筛选出水解度和HMG-CoA还原酶抑制率都较高的胰蛋白酶为最佳水解酶,以单因素试验、中心组合实验等实验设计方法优化了β-乳球蛋白的水解条件,然后测定了不同水解阶段的水解产物体对HMG-CoA还原酶活性的影响。结果表明:胰蛋白酶水解β-乳球蛋白9h水解产物具有相对较高的HMG-CoA还原酶抑制活性,约为66.67%。4.选择SepHadexG-25为层析材料对β-乳球蛋白源目标活性肽进行分离。用PH8.0、30 mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱,分离出5个相对较窄的组分峰,其中第3组分峰对HMG-CoA还原酶的抑制率达43.75%。对分离所得活性肽分子量范围的定性采用了Tricine-SDS-PAGE电泳法,电泳结果表明:具有较高HMG-CoA还原酶抑制活性的第3、4组分中β-乳球蛋白源活性肽的分子量范围在2000～4100之间。5.CaC0-2细胞培养体外实验:添加目标活性肽的实验组1( 0.27±0.021)、实验组2(0.25±0.019)、实验组3(0.21±0.014)、实验组4(0.17±0.02)中的水溶性胆固醇的含量低于实验组5(β-乳球蛋白、0.47±0.017)、实验组6(乳清蛋白、0.59±0.023),且显著低于空白对照组(0.709)。