论文部分内容阅读
目的:随着生活水平的提高、生活方式的改变,非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的患病率逐年上升,严重威胁人类健康。1)探讨乌鲁木齐地区NAFLD的患病特点及危险因素,并评价NAFLD患者LSM与相关代谢参数的关系;2)研究雪菊总黄酮提取物(CTTFE)对小鼠NAFLD形成的抑制作用及其可能机制;3)研究雪菊主要成分CTTFE、黄诺玛苷(CT01)和马里苷(CT02)对H2O2诱导人肝LO2细胞损伤的保护作用及其机制。为NAFLD的防治提供更多的理论依据。方法:第一部分以2574例体检者资料为研究对象。将研究对象分为NAFLD组和对照组,分析两组的生化指标及相关疾病患病率,采用多因素logistic回归分析评价NAFLD的危险因素。再进一步将NAFLD组分成肝脏硬度值(LSM)升高组和正常组,分析两组的生化指标及相关疾病的患病率,采用多因素logistic回归分析评价NALFD患者发生LSM升高的危险因素。第二部分采用昆明种雄性小鼠,将小鼠随机分为正常对照组、模型组、CTTFE100、200 mg/kg组及非诺贝特40 mg/kg组。小鼠在以高脂乳剂复制NAFLD模型的同时,给予相应的药物8周后,观察小鼠的饮食状况、体重、测定肝重、肝重系数、血脂、肝脂、肝功能及抗氧化能力;用光镜观察肝脏的脂肪变性程度;用Western blot方法,检测肝组织中脂肪分化相关蛋白(ADRP)表达的变化。第三部分采用人肝LO2细胞系,设置对照组、H2O2模型组(浓度为100μmol/L)、雪菊主要成分CTTFE、黄诺玛苷(CT01)和马里苷(CT02)分为低中高干预组(25、50、100μmol/L)。采用MTT法检测CTTFE、CT01和CT02对LO2细胞活力的影响;TUNEL法检测细胞凋亡率;荧光原位表达法检测caspase-3的活性;NO试剂盒检测NO水平。结果:第一部分本研究共检出NAFLD患者930例,总患病率为36.13%。男性患病率为42.38%,女性患病率为30.13%,男女NAFLD患病率有统计学差异(P<0.001)。按性别及年龄分层后,NAFLD总患病率在60~69岁组最高,达51.6%,男性在40~49岁组最高,达52.3%,女性在70岁以上组最高,达57.5%。NAFLD组的年龄、体重指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、腰围(WC)、臀围(HC)、腰臀比(WHR)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿酸(UA)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(tc)及低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)值均较对照组高,且有显著的统计学差异(p<0.001)。与对照组相比,nafld组高tg、高tc、低hdl-c、高ldl-c、高血压、空腹血糖调节受损或糖尿病、肥胖、高尿酸血症及肝功能异常的患病率升高,两组相比有显著的统计学差异(p<0.001),多因素logistic回归结果显示性别、年龄、sbp、alt、fbg、ua、tg及ldl-c与nafld密切相关,or值均>1,为nafld的危险因素。930例nafld患者中高lsm组的年龄、bmi、sbp、dbp、wc、hc、whc、ast、hba1c、tg值均较正常lsm组高,且有显著统计学差异(p<0.05或p<0.001)。高lsm高tg、高tc、低hdl-c、高ldl-c、高血压、糖代谢紊乱、肥胖、高尿酸血症及肝功能异常的患病率高于正常lsm组,其中高血压、血糖代谢紊乱及肥胖的患病率两组间有统计学差异(p<0.05),多因素logistic回归模型结果显示年龄、sbp、tg与lsm升高密切相关,为lsm升高的危险因素。第二部分在给予cttfe100-200mg/kg8周后,从肝脏病理学结果可以看出成功复制出小鼠nafld模型。cttfe低、高剂量可使小鼠肝组织脂肪变性的程度明显减轻。与模型组相比,cttfe低、高剂量组肝重下降,但无统计学差异(p>0.05);肝重系数下降,具有统计学差异(p<0.05);肝组织中tc含量下降,具有统计学差异(p<0.05);肝组织中tg含量下降,但无统计学差异(p>0.05);ast、alt及alp水平没有明显变化,无统计学差异(p>0.05);cttfe低剂量组血清tg含量下降(p<0.05),cttfe高剂量组血清tg含量下降(p<0.01),且呈一定的量效关系;cttfe低、高剂量组血清tc含量均有一定程度的下降,但无统计学差异(p>0.05)。cttfe低、高剂量组血清hdl-c含量均有一定的下降,其中高剂量组有统计学差异(p<0.05),cttfe低、高剂量组血清ldl-c升高,但无统计学差异(p>0.05)。cttfe低、高剂量组肝中的mda含量均下降(p<0.05)。cttfe低、高剂量组肝中的gsh-px含量均有升高,但均无统计学差异(p>0.05)。westernblot检测结果显示,cttfe低、高剂量干预后均可降低adrp蛋白的表达,具有统计学差异(p<0.05)。第三部分与对照组相比,h2o2诱导的lo2细胞组,细胞活力明显降低(p<0.05);细胞凋亡率明显增加(p<0.05);caspase-3活性明显升高(p<0.05);no水平明显升高。与h2o2组相比,不同浓度(25、50、100μmol/l)cttfe、ct01和ct02干预lo2细胞,细胞活力明显提高;可有效抑制肝细胞凋亡的发生;caspase-3的活性明显降低;抑制no的释放,中、高浓度组差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1)乌鲁木齐市nafld的患病率较高,较前有增加趋势。与肥胖、血脂异常、血糖代谢紊乱、高血压、高尿酸血症等多种代谢紊乱相关。因此,重视nafld的早期防治,积极治疗糖脂代谢紊乱、高血压、高尿酸血症等,对于防止nafld进一步发展具有非常重要的意义。2)在本实验条件下,cttfe可抑制高脂乳剂诱导的小鼠nafld的形成,对伴有的血脂异常有一定的调节作用,部分机制可能与其调节血脂紊乱、缓解氧化应激/脂质过氧化损伤以及下调ADRP蛋白的表达有关。3)雪菊三种有效成分CTTFE、CT01、CT02均对H2O2诱导的人肝LO2细胞损伤具有保护效应,可提高细胞的活力,其抑制细胞凋亡、caspase-3活性的升高及NO的释放,可能是其肝细胞保护的重要机制之一。