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研究背景与目的：VEGF-B作为一个重要的细胞内皮生长因子，具有多种重要的生理功能。
本研究通过克隆人VEGF-B cDNA来构建原核表达载体，并进行高效表达和纯化，利用基因工程技术来生产重组蛋白。
材料与方法：根据GenBank中人VEGF-B成熟态的cDNA序列，结合表达载体pET-28a的特点设计、合成一对特异性引物。采用PCR的方法扩增人成熟VEGF-B蛋白cDNA片段，然后将其定向克隆到载体pET-28a中，构建原核表达重组载体pET-28a-VEGF-B；重组载体转入大肠杆菌DH5α扩增、提取后，用PCR、限制性内切酶酶切以及DNA序列测定等方法进行鉴定。鉴定正确的阳性pET-28a-VEGF-B重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过K+抗性筛选获得稳定表达的阳性工程菌；以IPTG诱导工程菌高效表达重组蛋白VEGF-B，利用His-tag亲合层析、琼脂糖凝胶层析对重组VEGF-B蛋白进行分离纯化。
结果：
1、成功的构建了VEGF-B cDNA原核表达载体pET-28a-VEGF-B；建立了稳定转化pET-28a-VEGF-B重组质粒的大肠杆菌细胞株BL21-pET-28a-VEGF-B，并使VEGF-B cDNA在转化细胞内获得高效稳定表达。
2、确立了工程菌以可溶性形式高效表达重组VEGF-B蛋白的培养条件，建立了高效纯化重组VEGF-B蛋白的工艺，较好地纯化出了VEGF-B蛋白，为以后进行更加深入的研究准备了基本条件。