葡萄糖氧化酶(GO)基因在番茄中的遗传转化及其抗病机理研究

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植物在抵御病原侵染时产生一系列的防御机制。在病原侵染的位点上坏死斑的形成与诸如细胞壁的加强、植保素合成及病程相关蛋白的积累等的防御反应相关联。在植物和病原菌的相互作用中,最早响应之一是O2-(Superoxide),OH-(Hydroxy radical)和H2O2等活性氧的大量急剧产生,而且这种活性氧的迸发被假设是由超敏反应(HR)介导的。活性氧不仅具有直接杀死病原菌的作用,而且作为信号分子诱导防御系统基因的表达,并最终诱导系统产生获得性抗性。葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GO)可以催化β-D-葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和H2O2。很多真菌产生GO 作为一种抗微生物的代谢物拮抗微生物用以生防控制。因为H2O2 能有效地抑制细菌和真菌的生长,参与膜脂过氧化,而且H2O2 促进细胞壁木质化和HR 细胞的死亡。此外, H2O2 是一种扩散的小分子,跨过细胞膜进入病原菌侵染点以外的组织中,作为第二信使激活防卫基因的表达,最终导致对病原菌产生抗性。由于GO 的这种特性为抗病植物的选育提供了一条新的途径。很多试验证实转GO 基因植物显示出对病原菌的广谱抗病性。1 番茄组织再生及其遗传转化体系的优化本研究首先以番茄10 个自交系为试验材料,分别研究其不同激素组合对出愈和诱芽的影响,筛选出番茄自交系外植体再生的最佳激素组合为MS+ZT 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L。试验结果表明,10 个番茄自交系间外植体出愈率和诱芽率均存在较大的差异说明基因型不同的自交系材料,其内源激素水平有所差异。同时研究出再生植株生根的最适宜培养基为MS 培养基中添加0.5mg/L IAA。采用正交试验设计,利用上述筛选出的再生体系对农杆菌侵染条件进行优化。结果表明,预培养2-3 天、农杆菌的稀释30 倍、侵染时间20min,共培养2 天,即可达到最佳的遗传转化效果,使番茄植株遗传转化效率达到最大化。2 植物表达载体的构建及在番茄中的遗传表达本研究构建了由病原诱导启动子驱动的来自于黑曲霉的GO 基因植物表达载体pCPGO,通过农杆菌介导,采用叶盘法进行番茄5 个自交系的遗传转化,获得了58 株转基因植株。经PCR 检测和Southern 杂交分析证明GO 基因已整合到番茄基因组中。Northern 杂交结果表明GO 基因在转录水平上已经表达。而且通过H2O2 定性和定量检测证明了GO 基因的表达。所有转基因植株的结实率都有不同程度的减少,转基因番茄
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