盐酸克伦特罗在绵羊体内蓄积消除规律及残留预测模型的研究

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本研究分为三部分,第一部分为运用同位素内标法建立绵羊体液(血浆、尿液)及组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉、毛发)中盐酸克伦特罗(CL)残留的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法;第二部分为研究绵羊体液(血浆、尿液、唾液)及组织(眼睛、肝脏、肺脏、肾脏、心脏、肌肉、毛发)中CL的残留与消除;第三部分为研究血浆与组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉)及组织间CL残留的预测模型。一、运用同位素内标法建立了绵羊体液(血浆、尿液)及组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉、毛发)中CL残留的LC-MS/MS检测方法。样品在前处理过程中加入盐酸克伦特罗-D9(D9-CL)内标化合物,经过提取、净化、过滤,采用LC-MS/MS检测,检测结果通过内标定量法计算获得。优化后,血浆中CL的线性范围为0.05~200ng/mL,检测限为0.01ng/mL,定量限为0.03ng/mL,平均回收率为109.42%112.34%,RSD低于2.69%;尿液中CL的线性范围为0.15~200ng/mL,检测限为0.04ng/mL,定量限为0.13ng/mL,平均回收率为94.65%~104.37%,RSD低于8.76%;组织样品肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉中CL的线性范围相同,均为0.15~100ng/g,检测限为0.05ng/g,定量限为0.15ng/g,平均回收率为95.29%~132.03%,RSD低于13.90%;毛发中CL的线性范围为0.5200ng/g,检测限为0.17ng/g,定量限为0.5ng/g,平均回收率为100.71%~106.68%,RSD低于3.76%;线性范围的相关系数在0.9941~0.9999之间。本方法可准确地检测出绵羊体液(血浆、尿液)及组织(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉、毛发)中CL的残留浓度。二、研究了绵羊体液(血浆、尿液、唾液、胆汁)及组织(眼睛、肝脏、肺脏、肾脏、心脏、肌肉、毛发)中CL的残留与消除规律。24只绵羊体重为30±5kg,以15μg/kg BW剂量连续灌胃给药21d,停药21d。在给药期与停药期内的规定采样时间点采集绵羊体液及组织样品。试验结果显示,绵羊血浆样品中CL的残留浓度在给药1h后即可检到,说明动物体吸收CL迅速。在给药期间的第7d与第20d血浆中CL出现两个浓度峰值,分别为6.35±3.28ng/mL、4.61±0.79ng/mL。血浆中CL的消除为二相消除,在停药8~24h血浆中CL的残留浓度下降迅速,半衰期为13.72h,在停药24~505h期间,血浆中CL的残留浓度下降缓慢,半衰期为108.28h;动物体主要是通过尿液来排泄CL,给药后2h可在尿液中检测到CL,浓度为80.19±60.33ng/mL,尿液中CL的残留浓度较血浆中的浓度高。尿液中CL的消除亦为二相消除,停药第0-3d的半衰期为12.23h,停药第3-21d的半衰期为145.64h;唾液中CL浓度在停药第0-48h呈下降趋势,但是受多方面因素影响,不能确定唾液中CL消除规律的拟合方程及消除半衰期;CL在绵羊的各个组织中的残留情况不相同,CL普遍残留在绵羊的眼睛、肝脏、肾脏、心脏、脾脏与肌肉中,其中在眼睛中CL的残留浓度最高,消除最慢;肝脏中CL残留浓度次高,然后为脾脏、肺脏、肾脏,心脏与肌肉残留浓度最低;肝脏、脾脏、心脏中CL消除较眼睛慢,肺脏、肾脏、肌肉中CL消除较快;CL在毛发内的蓄积量较高、消除慢,在停药后仍能保持上升或稳定;停药第18天,毛发中CL的残留浓度为9.29±6.34ng/g,而停药第21d,视网膜与肝脏中CL的残留浓度分别为51.24ng/g(眼睛样品有限,无法计算标准差)、6.46±1.72ng/g。毛发、眼睛、肝脏均可作为监测CL非法使用的理想靶标。三、研究了血浆与组织器官(肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏、肌肉)及各组织器官之间CL残留浓度的预测模型。模拟了血浆与组织及组织间CL残留浓度关系的方程,模型方程R2均大于0.9,方差分析结果P值均小于0.01。预测模型可通过血浆或某种组织中CL的残留浓度对其他组织中CL的残留浓度进行预测,避免了依靠血浆检测对组织中CL残留情况的误判。若已知某种组织食品中CL的残留浓度可预测其他组织中CL是否超出最高残留限量,对追溯与其来自同一动物体的富含CL的动物食品起到帮助。
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