【摘 要】
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目的:观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转染的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)移植治疗慢性深静脉血栓的效果。方法:1、Fic
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目的:观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转染的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)移植治疗慢性深静脉血栓的效果。方法:1、Ficoll法分离Wistar大鼠的骨髓单个核细胞,EBM-2MV培养基诱导、培养、扩增骨髓源性EPCs。2、倒置显微镜下观察EPCs生长变化情况,拍照记录其特征性形态并鉴定,MTT法描绘生长曲线。3、人胚肾细胞293A(HEK293A)扩增腺病毒,并将收集的病毒以适当滴度转染EPCs,转染后行Dil体外标记。4、结扎大鼠(300g左右)肾下段下腔静脉建立慢性深静脉血栓模型,随机分成四组,即:A组、B组、C组和D组,每组16只动物。5、经大鼠股静脉注射细胞,行移植实验:A组:注射1ml经Ad-GFP-VEGF165转染的EPCs细胞悬液;B组:注射1ml单纯EPCs细胞悬液;C组:注射1ml经Ad-GFP转染的EPCs细胞悬液;D组:注射1ml培养基。6、不同时间段取出血栓段下腔静脉及血栓,应用HE染色及vWF免疫组化染色观察血栓机化、血管再通情况,高倍显微镜下计数血栓中再通毛细血管密度。结果:1、EBM-2MV培养基培养经Ficoll法分离的骨髓单个核细胞可以诱导生成EPCs;2、经HEK293A细胞扩增可以获得高滴度的腺病毒,并且转染EPCs效率高;3、构建大鼠下腔静脉慢性血栓模型方法简便、快速、血栓形成确切;4、基因修饰的EPCs移植能明显促进血栓机化、血管再通,促进侧支形成。结论:经VEGF165转染的EPCs移植后明显加快血栓机化、血管再通的速度。
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