细胞凋亡也称程序性细胞死亡(Programmed cell death)，是具有特殊形态学和生化改变的生理性细胞死亡形式。家蚕细胞凋亡的研究，对揭示全变态昆虫的发育生物学、遗传调控机制具有重大的理论意义，并且对蚕业科学的应用研究也有非常重要的理论指导意义。本研究旨在对放线菌素D诱导家蚕BmE细胞凋亡机制进行初步的研究，并对家蚕血淋巴抑制该凋亡的机制进行初步探讨；分析比较了多种细胞凋亡检测方法，筛选、优化适合检测家蚕细胞凋亡的方法，建立家蚕细胞凋亡的简单模型；为研究家蚕细胞凋亡奠定了初步的细胞学基础。 本论文利用形态学观察、分子生物学检测方法以及放线菌素D体外共培养方法，研究了家蚕细胞凋亡特征；在显微镜下，观察细胞核的形态变化特征；利用琼脂糖凝胶电泳法检测了凋亡细胞的DNA降解片段；利用PI单染和Annexin V／PI双染在流式细胞仪上定性定量检测了细胞总凋亡率和早期凋亡率。检测了家蚕蚕血淋巴对NPV中的抗凋亡基因p35基因表达的影响。 研究结果如下： 1) 家蚕BmE细胞凋亡过程的变化： 当放线菌素D浓度为150ng／ml作用12h，家蚕BmE细胞发生了明显凋亡。在荧光显微镜下观察到细胞核固缩、凝聚和断裂，出现浓染致密的颗粒块；染色质出现边聚现象，即染色质凝聚成块靠近核膜，成半月状；细胞核内出现3个或者3个以上的荧光碎片凋亡小体；在电镜下可见染色质断裂、染色质边缘化、凋亡小体等典型的细胞凋亡现象。 在0h，12h，24h，36h的时间范围内，家蚕细胞的凋亡指数随时间的延长而增加，反映了放线菌素D诱导凋亡的时间依赖性效应。在相同的作用时间下，随着药物浓度的增加，DNA梯度条带也随之变得明显。在同一浓度下，拖带现象随放线菌素D作用时间的延长而显著，即在一定范围内呈现剂量依赖性和时间依赖性。 家蚕BmE细胞的凋亡峰变化，浓度分别为0、50、100、200 ng／ml的放线菌素D作用12hPI单染流式检测细胞凋亡率分别是1.82+0.57％、1.35±0.76％、2.35±0.98％、8.21±1.86％、13.54±2.52％，剂量不同，诱导的凋亡细胞所占百分率不相同，凋亡百分率随时间延长而增高。然而50ng／ml作用12小时之后，反而凋亡率比对照低，正如以前文献中报道的，低