保心康对心力衰竭大鼠模型心肌细胞凋亡调控作用的研究

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保心康对气阳虚型心力衰竭患者具有良好的临床疗效,为进一步探讨保心康的药理作用,建立腹主动脉缩窄造成心肌肥厚心力衰竭的大鼠模型,观察心力衰竭大鼠模型左心室肌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的序列变化,并研究保心康对左心室肌细胞表达Bax和Bcl-2蛋白的影响。实验研究分为两部分,第一部分:研究压力超负荷大鼠各时间点(造模后1、4、7、10、14、21、30、40天)Bax、Bcl-2蛋白的表达情况;第二部分实验分为三组,保心康组、蒸馏水组和假手术组。根据第一部分实验各时间点蛋白的表达情况,选择Bax与Bcl-2比值最大的时间点为观察点,研究保心康对大鼠左心室肌细胞凋亡调控基因表达的干预作用。Bax和Bcl-2的表达用流式细胞仪进行检测。我们建立了心室肌单细胞悬液的制备方法,同时,创建了流式细胞仪定量检测心室肌细胞胞内抗原的方法,结果:第一部分实验,在腹主动脉缩窄之后第1天,大鼠左心室心肌细胞Bax蛋白的表达率较高(63.75%),Bcl-2蛋白的表达率则较低(31.45%),Bax/Bcl-2较高(2.02),在以后的观察点中,Bax蛋白的表达率变化不大,波动于50-60%之间,而Bcl-2蛋白的表达则于第7天升至最高值(71.75%),尔后开始下降,第30天时其表达率最低(22.8%);Bax/Bcl-2于第4天时下降,第7天时降至最低,随后开始逐渐上升,第30天达到峰值(2.4),到第40天时又已经下降;第二部分实验,蒸馏水组大鼠心脏和左心室重量明显增加,而保心康组大鼠心脏和左心室重量与假手术组相似,心脏质量指数和左心室质量指数也显示同样的结果;蒸馏水组大鼠左心室心肌细胞表达Bax蛋白与假手术组相似,但是Bcl-2的表达率则明显低于假手术组(P<0.05),Bax/Bcl-2明显高于假手术组(P<0.01);保心康组两蛋白的表达率及其比值与蒸馏水组比较,具有显著性或非常显著性差异(P<0.05或P<0.01),同时,保心康组大鼠左心室心肌细胞中Bax、Bcl-2的表达率与假手术组比较无显著性差异(P>0.05),然而二者的比值则明显低于假手术组(P<0.05)。假手术大鼠及主动脉缩窄致心衰大鼠,雌性大鼠心脏、左心室重量较雄性的小,假手术雌性大鼠的心脏质量指数也较雄性低,但雌性心衰大鼠的心脏质量指数则与雄性无差别;雌性假手术大鼠和心衰大鼠Bax蛋白的表达率分别与雄性的无差异,但无论是假手术大鼠还是心衰大鼠,雌性Bcl-2的表达率均低于相应的雄性大鼠,虽然保心康组雌雄性大鼠左心室肌细胞Bcl-2的表达均升高,但Bax的表达在雄性降低更明显。结论:1.心力衰竭大鼠模型的左心室心肌细胞中,Bax/Bcl-2于第4天时下降,第7天时降至最低,随后开始逐渐上升,第30天达到峰值,推论腹主动脉缩窄后,心肌细胞凋亡发生的高峰可能在第30天;2.雌性大鼠之与雄性相比,可能对压力超负荷的具有更强的适应性代偿能力,或者较低的凋亡率,或者二者兼而有之;3.保心康具有预防压力超负荷大鼠左心室肥厚的作用;4.保心康具有上调腹主动脉缩窄造成的·u力衰竭大鼠模型左。。室。u M细胞hcf毛基因的表达,下调bax基固的表达,同时降低saatsclz,从而可能通过此途径抑制心肌细胞的凋亡,而且保心康对雄性大鼠的疗效可能更好。
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