目的：　　白细胞介素(interleukin，IL)-36亚家族包括五位成员：IL-36a、IL-36b、IL-36γ、IL-36受体拮抗剂(IL-36 receptor antagonist，IL-36Ra)和IL-38。IL-36Ra之前又被称作IL-1家族5(IL-1 family5，IL-1F5)、FIL-1δ和IL-1δ。IL-36Ra与IL-1受体相关蛋白2(IL-1 rece ptor-related protein2，IL-1Rrp2)结合后因不具有IL-36a、IL-36b及IL-36γ所具有的B4/5和b11/12循环结构，从而阻碍IL-1受体辅助蛋白(IL-1 receptor accessory protein，IL-1R AcP)的募集和功能性信号复合体的形成，最终可抑制转录因子(nuclear factor，NF)-?B和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)通路发挥其生物学功能。近年来，肝脏疾病的全球内发病率一直居于首位，其中肝炎尤为突出，病毒感染是引起肝炎的主要原因，病毒性肝炎的主要发病机制是病毒抗原进入人体后引起的人一系列的免疫反应从而造成肝损伤。刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)诱导的急性小鼠肝损伤能够很好地模拟病毒性肝炎与自身免疫性肝炎。因此，本研究拟克隆人IL-36Ra基因，构建其真核、原核表达载体，构建ConA诱导小鼠肝损伤模型，利用ConA诱导的肝损伤模型，从分子水平和动物水平研究IL-36Ra的过表达在免疫性肝炎中的作用，并初步探讨其作用机制，为临床肝病的治疗提供理论和实验依据。　　方法：　　1.从人皮肤中提取总RNA，设计引物通过RT-PCR方法扩增IL-36Ra基因的全长编码序列，将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His中，构建其重组质粒pcDNA-3.1-hIL-36Ra-V5-His；以pcDNA-3.1-hIL-36Ra-V5-His为模板扩增IL-36Ra成熟蛋白编码区，构建IL-36Ra原核表达载体pET-44-hIL-36Ra。　　2.构建ConA诱导的肝损伤动物模型：将BALB/c小鼠分为4组，每组12只，正常对照组注射等量生理盐水，其余3组小鼠分别注射ConA制备肝损伤模型(ConA诱导剂量为15 mg/kg)。将构建的质粒pcDNA3.1-hIL-36Ra-V5-His以尾静脉注射方式提前1 d注射到小鼠体内，在造模第8小时和第24小时分别处死部分小鼠，收集样本。小鼠肝组织病理学变化通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining，HE)方法检测，小鼠血清中转氨酶水平的检测采用丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase，ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase，AST)法，相关细胞因子和趋化因子含量的测定则通过逆转录PCR和细胞因子的酶联免疫吸附法测定(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)。　　结果：　　1.将扩增出人IL-36Ra的基因序列插入到pcDNA3.1/V5-His中，成功构建了IL-36Ra原核、真核表达载体，测序结果均与GenBank中的基因序列一致。　　2.造模8 h、24 h分批处死小鼠，心脏采血后，实验组小鼠血清中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF)-a、干扰素(interferon，IFN)-a、IL-17、AST和ALT水平在注射ConA后8 h较ConA模型组和阴性对照组均有降低(P<0.01)，小鼠肝组织切片经HE染色，光学显微镜下可观察到注射IL-36Ra重组质粒的小鼠肝脏损伤均较模型组和阴性对照组有不同程度的减轻，趋近空白对照组结果。　　结论：　　成功构建了IL-36Ra原核和真核表达载体。并将其真核载体pcDNA-3.1-hIL-36Ra-V5-His采用无内毒素质粒大提试剂盒提取后采用高压流体力学注射方式注射到肝损伤模型小鼠体内。小鼠肝部病理切片，血清中转氨酶的水平及逆转录PCR和ELISA的结果均显示IL-36Ra对小鼠肝损伤具有减轻作用，初步证实了IL-36Ra对ConA诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用。它的作用可能是通过抑制一系列炎症性细胞因子的分泌发挥的。